一、抗体的检测及应用抗体进行的检测
1．概念 免疫学检测的基本原理是抗原-抗体的特异性结合。其结合特点包括：特异性、可逆性、比例性。由于抗体常存在于血清中，因此，习惯上将体外的抗原-抗体反应称为血清学反应，相关的技术称为血清学技术。
2．血凝抑制 当病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触，这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为血凝抑制反应。
3．凝集反应和血型的鉴定 颗粒性抗原或吸附于颗粒上的可溶性抗原（或抗体）与相应的抗体（或抗原）结合后出现肉眼可见的凝集现象为凝集反应，分为直接凝集和间接凝集两种。两者的区别在于：直接凝集是颗粒性抗原（细菌、红细胞）参与，如用此法鉴定细菌和血型；而间接凝集是可溶性抗原或抗体包被在红细胞或乳胶颗粒载体表面后再与相应抗体或抗原作用而出现凝集。用此法检测乙型病毒性肝炎表面抗原和甲胎蛋白等。
4．免疫荧光（2000） 免疫荧光技术是用荧光素标记抗体或抗原分子检测相对应的抗原或抗体分子的一种技术。常用的荧光素有异硫氰酸荧光素（FITC）、藻红蛋白（PE）等，这些物质在激发荧光的作用下，可直接发出荧光，前者发黄绿色荧光，后者发红色荧光。免疫荧光技术可用于鉴定免疫细胞的CD分子及检测自身免疫病的抗核抗体等。
5．放射免疫 放射免疫分析是根据竞争结合原理，应用放射性核素标记的抗原与未标记抗原竞争结合相应的抗体，通过抗原抗体复合物的放射性活性判断结果。该方法将核素的敏感性与抗原抗体结合的特异性结合起来，具有重复性好、准确性高等优点，广泛用于激素、药物等微量物质的检测。
6．酶免疫（ELISA和免疫组化） 用酶标记一抗或二抗检测特异性抗原或抗体的方法。酶联免疫吸附试验（ELISA）用酶标记抗体或抗原，利用抗原抗体反应来检测相应抗原或抗体的方法，通过底物显色、光密度判定标本中抗体或抗原的含量。免疫组化是应用标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应，对相应抗原进行定位、定性、定量检测的技术。
7．免疫电镜 免疫化学技术与电镜技术结合，在超微结构水平观察抗原、抗体结合定位的方法。利用带有特殊标记的抗体与相应抗原相结合，形成一定的电子密度复合物，可在电子显微镜下观察而定位。
8．免疫沉淀 将抗体和抗原特异性结合用于研究蛋白质相互作用的经典方法，可确定两种蛋白质在细胞内生理性相互作用。
9．免疫印迹 又称Western Blotting，是将抗原物质在聚丙烯酰胺凝胶电泳分离后转至硝酸纤维素膜上，用酶标或放射性核素标记的抗体识别和结合抗原，加底物显色或做放射自显影显示结果。该法能测定待检蛋白质的分子量和特异性，也是确认HIV感染的方法。
二、免疫细胞的分离
1．Ficoll-Hypaque离心法 聚蔗糖-泛影葡胺离心法常用于外周血单个核细胞的分离，其原理是根据外周血中各种血细胞比重不同使不同密度的细胞呈梯度分布。
2．磁珠分离法 是一种特异分离所需淋巴细胞的方法。首先将特异性抗体吸附在磁性微珠上，加至细胞悬液中，具有相应表面标志的细胞与磁珠上的特异性抗体结合。将此反应管置于磁场中，携带有相应细胞的免疫磁珠吸附于靠近磁铁的管壁上，将磁珠结合细胞与未结合磁珠细胞分开，即可获得纯度高的所需细胞。
3．流式细胞术（2000） 又称为荧光激活细胞分选仪分离法（FACS），是一种集光学、流体力学、电力学和计算机技术于一体，可对细胞进行多参数定量测定和综合分析的方法。
三、免疫细胞的特异性、数量和功能检测
1．流式细胞术 根据表面表达CD分子的种类、水平和多种CD表达格局，以流式细胞术可以二维荧光方图和比例统计显示待测细胞群体中某群CD+细胞的比例及数量、CD分子表达水平的高低，同时以IFNγ等细胞因子或Annexin V凋亡标志等，可测定的功能性CTL、凋亡细胞的比例，以FITC等标记靶细胞，通过荧光强度的减弱程度可测定CTL的杀伤活性。
2．增殖试验 也称淋巴细胞转化实验。T细胞受到特异性抗原或有丝分裂原刺激后可发生增殖，通过形态计数法、3H-TdR或125I-UdR掺入法和MTT比色法进行检测。
3．细胞毒试验 是检测CTL、NK等细胞杀伤靶细胞活性的一种细胞学技术，主要用于肿瘤免疫、移植排斥反应和病毒感染等方面的研究。常用的方法有51Cr释放法、乳酸脱氢酶释放法、细胞染色法和凋亡细胞检测法。
4．细胞凋亡检测 凋亡是一种重要的生理和病理过程，目前检测细胞凋亡的方法有形态学检测法、琼脂糖凝胶电泳法、FACS、TUNEL法。
5．芯片技术 将蛋白质、抗原或抗体固定到芯片的表面，利用蛋白质分子间特异性结合的原理和抗体抗原特异性结合的原理，检测相应的蛋白质、抗体或抗原。
6．细胞因子的生物活性检测 ①根据不同的细胞因子具有的不同的生物学活性，可采用相应的测定方法：细胞增殖或增殖抑制法、细胞病变抑制法。②ELISA法。③DNA聚合酶链反应。
历年考点串讲
近十年免疫学检测技术共考2题，均为A1型题。考试重点在免疫学检测技术的种类及其方法学的特点。为历年偶考。常考的细节有：
1．肥达反应属于凝集反应。
2．标记技术中最敏感的方法是核素标记法。
3．要从混合的T、B细胞中分离T细胞，最佳的方法是流式细胞技术。
4．检测血清中一种微量的小分子肽，最敏感的方法是放射免疫分析法。
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