血清铁测定（亚铁嗪比色法）

实验七　血清铁测定（亚铁嗪比色法）

【教学目标】

（1）掌握血清铁测定的原理、方法及注意事项。

（2）了解血清铁各种测定方法的优缺点。

【实验原理】

血清中的铁与运铁蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，再被还原剂还原成二价铁，并与亚铁嗪直接作用生成紫红色复合物，在562nm处有吸收峰，与同样处理的铁标准液比较，即可求得血清铁含量。

【试剂】

（1）甘氨酸－盐酸缓冲液（0．4mol/L，pH2．8）：0．4mol/L甘氨酸溶液58mL、0．4 mol/L盐酸溶液42mL和Triton X－100 3mL混合后再加入无水亚硫酸钠800mg，使其充分溶解。

（2）亚铁嗪显色剂：称取亚铁嗪0．6g溶于去离子水100mL中。

（3）铁标准储存液（1．79mmol/L）：精确称取优级纯硫酸高铁铵［NH₄Fe（SO₄）₄·12H4O］0．8635g，置于1L容量瓶中，加入去离子水约50mL，逐滴加入浓硫酸5 mL，溶解后用去离子水定容至刻度，混匀。置于棕色瓶中可长期保存。

（4）铁标准应用液（35．8μmol/L）：在100mL容量瓶中加入铁标准储存液2mL，加入去离子水50mL及浓硫酸0．5mL，再用去离子水稀释至刻度，混匀。

【器材】

试管、试管架、吸管、加样器、恒温水浴箱、721型分光光度计。

【操作】

取试管三支，标明空白管、标准管、测定管，按实验表7－1操作。

实验表7－1　亚铁嗪比色法测定血清铁操作步骤

混匀，置于室温15min或37℃恒温水浴箱中10min，于562nm波长处，以空白管调零再次读取各管吸光度。

【计算】

【提示】

由于两次测定时溶液体积不同，故应将空白管吸光度乘以0．97校正。

【参考范围】

成年男性：11～30μmol/L。

成年女性：9～27μmol/L。

【临床意义】

（1）血清铁浓度升高在临床上主要见于以下三种情况：①血细胞破坏增多，如溶血性贫血；②铁的利用减少，如再生障碍性贫血；③铁释放增加，如急性肝炎从坏死肝细胞中释放出铁。

（2）血清铁浓度降低在临床上主要见于以下三种情况：①体内铁不足，如营养不良等原因引起的缺铁性贫血；②铁的丢失增加，最普通的原因是失血，如泌尿生殖道及胃肠道出血等；③铁的释放减少，如急性或慢性感染、恶性肿瘤等，储存于单核巨噬细胞系统内的铁释放减少。

【注意事项】

（1）实验用水必须经过去离子处理。玻璃器材必须用10%（V/V）盐酸浸泡24h，取出后再用去离子水冲洗后方可应用。应避免与铁器接触，以防止污染。

（2）溶血标本对测定有影响，因此血清应避免溶血。

（3）标准液呈色可稳定24h；血清呈色在30min内是稳定的，此后它们的颜色会慢慢增加，大约每小时吸光度增加0．002，因此，应在1h内比色完毕。

（4）血清铁还存在着日内生理性变异，早上的值最高，晚上的值最低。

（5）所用试剂要求纯度高，含铁量极微。

【思考题】

（1）阐述血清铁测定的原理及注意事项。

（2）在血清铁测定中，对实验用水和器材有何要求？为什么？

（沈红元）