抗原或抗体的检测

（一）抗原、抗体检测的原理

在体外一定条件下，抗原和相应抗体结合并出现肉眼可见的反应现象，根据此原理，试验时可用已知的抗原或抗体来检测相应的抗体或抗原，并可进行定性、定量、定位的分析。体外抗原抗体反应分特异性结合阶段和可见反应阶段，其可见反应的出现需适当的抗原抗体比例，有合适电解质参与，且温度与酸碱度适宜。

在抗原、抗体的定量检测中，常把抗原或抗体一方浓度固定，另一方做一系列稀释，以出现明显可见反应最高稀释倍数作为效价。效价越高反应标本中所含待检成分越多。

（二）常用的抗原、抗体检测方法

1．凝集反应（agglutination）　细菌、细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合，在一定条件下出现肉眼可见的凝集块称为凝集反应。

（1）直接凝集反应：颗粒性抗原与相应的抗体直接结合所出现的凝集现象。常用的方法有玻片法和试管法①玻片法，为用已知的抗体与待测抗原在玻片上反应，用于抗原的定性检测，如细菌的鉴定分型及ABO血型的鉴定；②试管法，为在试管中连续稀释待测血清，加入已知颗粒性抗原，用于抗体的定量检测，如检测伤寒、副伤寒的肥达试验等。

（2）间接凝集反应：将蛋白质、多糖等可溶性抗原吸附在与免疫无关的载体颗粒表面做成诊断试剂，再与标本中相应的抗体结合，可出现载体颗粒的被动凝集现象，称间接凝集反应。常用的载体颗粒有人O型红细胞、胶乳颗粒、活性炭等。载体颗粒是红细胞的称间接血凝试验，是胶乳颗粒的称胶乳凝集试验。若将抗体吸附在红细胞上做成诊断试剂，用以检测抗原称为反相间接血凝试验；将已知的抗体与标本可溶性抗原反应，再加入致敏的颗粒，如标本中含有抗原就会结合消耗先加入的已知抗体，致敏的胶乳颗粒不再出现凝集，该反应称间接凝集抑制试验。间接凝集反应临床常用于类风湿性因子、梅毒反应素、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、甲胎蛋白（AFP）等检测。

2．沉淀反应（precipitation）　血清蛋白、组织液等可溶性抗原与相应抗体结合，在一定条件下形成肉眼可见的沉淀物称为沉淀反应。沉淀反应的应用有环状法、絮状法、琼脂扩散法和免疫比浊法。临床常用的有琼脂扩散法。

图13-2　单向琼脂扩散

（1）单向琼脂扩散试验：将一定量已知抗体与加热融化的琼脂凝胶混合制成琼脂板，在板中打孔，加入待测抗原，标本中的抗原向四周扩散，在抗原与抗体的浓度比例适当处形成白色沉淀环，沉淀环的直径与标本中抗原的含量成正比（图13-2）。常用于测定血清中的免疫球蛋白和补体各成分的含量。

（2）双向琼脂扩散试验：将抗原与抗体分别加于琼脂凝胶的小孔中自由扩散，若两者相对应，在比例适当处形成肉眼可见的白色沉淀线。若反应物中含有多种抗原抗体系统，则可出现多条沉淀线。此法常用于抗原或抗体的定性检测，以及抗原的组成或两种抗原相关的分析。

（3）免疫电泳技术：是电泳技术与琼脂扩散相结合的产物。这类方法缩短了反应时间，提高了灵敏度，如对流免疫电泳、免疫转印技术等，可用于病毒蛋白、核酸、Ig等抗原物的分离与分析。

3．免疫标记技术　是用荧光素、酶、放射性核素、胶体金、发光物质等标记已知的抗体或抗原，通过检测标记物来观察抗原抗体反应，从而对待测抗体或抗原定性、定量或定位。具有高灵敏度、特异快速等优点，是目前应用最广泛的敏感、可靠的免疫学检测方法。

（1）免疫酶技术：是用酶标记抗体或抗原，通过酶催化相应底物显色来判断结果，可用目测定性或酶标检测仪定量。常用的方法有酶联免疫吸附试验和酶免疫组化法，前者测定可溶性抗原或抗体，后者检测组织或细胞表面抗原。

酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是在固相载体（聚苯乙烯反应板）表面进行的抗原抗体反应。常用标记的酶有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等。基本方法有①间接法：将已知抗原包被固相载体，加入待检血清标本，洗涤后再加酶标记的抗抗体，洗后加底物观察显色反应，常用于检测特异性抗体；②双抗体夹心法：将已知抗体包被固相载体，加入待检标本，洗涤去除未结合成分，再加酶标记的特异性抗体，洗后加底物观察显色反应，常用于检测可溶性抗原（图13-3）。

图13-3　ELISA双抗体夹心法

（2）其他常用的标记技术：免疫荧光技术是用荧光素标记抗体与待测抗原反应，若两者特异性结合，则荧光抗体不易被洗脱，荧光显微镜下可见抗原抗体复合物呈现荧光，借此可对标本中的抗原进行鉴定和定位；放射性核素标记技术是用放射性核素标记抗原或抗体来进行抗原抗体反应，通过测定反应物中放射性核素的放射性来反映抗原或抗体的量，常用的方法为放射免疫分析；金标记技术是以硝酸纤维素膜为载体吸附抗原，用胶体金标记抗体，进行抗原抗体反应的免疫标记技术，临床上广泛应用斑点金免疫层析试验又称一步金法，检测尿中的绒毛膜促性腺激素（HCG）作为妊娠的早期诊断。