抗原或抗体的检测方法

根据抗原的性质、出现结果的现象、参与反应的成分不同，可将抗原抗体反应分为凝集反应、沉淀反应、补体参加的反应、采用标记物的抗原抗体反应等。

一、凝集反应

1．直接凝集　将细菌或红细胞与相应抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。一种方法是玻片凝集试验，用于定性测抗原，如ABO血型鉴定、细菌鉴定；另一种方法是试管凝集试验，在试管中系列稀释待检血清，加入已知颗粒性抗原，用于定量检测抗体，如诊断伤寒病的肥达凝集试验（Widal agglutination test）。

2．间接凝集　将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒物凝集的现象。也可用已知抗体包被乳胶颗粒，检测标本中的相应抗原。

二、沉淀反应

血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物，这一类反应称为沉淀反应（precipitation）。该类反应可检测到20μg／ml至2mg／ml水平的抗体或抗原。

1．单向免疫扩散（single immunodiffusion）　是将一定量已知抗体混于琼脂凝胶中制成琼脂板，在适当位置打孔后将抗原加入孔中扩散。抗原在扩散过程中与凝胶中的抗体相遇，形成以抗原孔为中心的沉淀环，环的直径与抗原含量成正相关。该法可用于测定血清IgG、IgM、IgA和补体C3等的含量。

2．双向免疫扩散（double immunodiffusion）　是将抗原与抗体分别加于琼脂凝胶的小孔中，二者自由向四周扩散，在相遇处形成沉淀线。如果反应体系中含两种以上的抗原抗体系统，则小孔间可出现两条以上的沉淀线。本法可用于抗原或抗体的定性、定量检测及组分分析。

3．免疫电泳（immunoelectrophoresis）　是先将待检血清标本作琼脂凝胶电泳，血清中的各蛋白组分各自电泳到不同的区带，然后与电泳方向平行挖一小槽，加入相应的抗血清，与已分成区带的蛋白抗原成分作双向免疫扩散，在各区带相应位置形成沉淀弧。通过与正常血清形成的沉淀弧数量、位置和形态进行比较，可分析标本中所含抗原成分的性质和含量。该法常用于血清蛋白种类分析以观察Ig（包括Ig不同类、亚类及型）的异常增多或缺失。

4．免疫比浊（immunonephelometry） 是在一定量的抗体中分别加入递增量的抗原，经一定时间后形成免疫复合物。用浊度计测量反应液体的浊度，复合物形成越多，浊度越高，可依据标准曲线推算样品中的抗原含量。

三、补体参加的反应

这类反应利用抗体与红细胞上的抗原结合，激活反应体系中的补体，导致红细胞的溶解，用溶血现象作为指示系统帮助结果判定。补体结合试验和溶血空斑试验均属此类反应。

四、用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应

1．免疫荧光法（immunofluorescence）　是用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标本中的抗原反应，置荧光显微镜下观察，抗原抗体复合物散发荧光，借此对标本中的抗原作鉴定和定位。常用的荧光素有异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）和藻红蛋白（phycoerythrin，PE）。

2．酶免疫测定（enzyme immunoassay，EIA）　是用酶标记的抗体进行的抗原抗体反应。它将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性相结合，通过酶作用于底物后显色来判定结果。敏感度可达ng／ml甚至pg／ml水平。常用于标记的酶有辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等。常用的方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）和酶免疫组化法，前者测定可溶性抗原或抗体，后者测定组织或细胞中的抗原。

3．放射免疫测定法（radioimmunoassay，RIA）　是用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测的技术。它将放射性核素的高灵敏性和抗原抗体反应的特异性相结合，使检测的敏感度达pg／ml水平。常用于标记的放射性核素有125I和131I。常用于胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素，吗啡、地高辛等药物以及IgE等微量物质测定。

4．化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA）　是将发光物质（如吖啶酯、鲁米诺等）标记抗原或抗体进行的反应，发光物质在反应剂（如过氧化阴离子）激发下生成激发态中间体，当激发态中间体回到稳定的基态时发射出光子，用发光分析仪能接收光信号，通过测定光子的产量反映待检样品中抗体或抗原的含量。该法灵敏度有时可高于放射免疫测定法，常用于血清超微量活性物质的测定，如甲状腺素等激素。

5．免疫印迹法（Immunoblotting）　又称Western blotting它将凝胶电泳与固相免疫结合，把电泳分区的蛋白质转移至固相载体，再用酶免疫、放射免疫等技术测定。该法能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测多种病毒的抗体或抗原。

6．免疫PCR（immuno－PCR，IM－PCR）　其原理是用一段已知的DNA分子作为标记物，结合一抗或二抗后，去检测相应抗原或抗体，再用PCR法扩增此段DNA分子，扩增产物用琼脂糖电泳定性，根据该DNA分子的存在与否，确定检测结果。该法敏感性高于放射免疫，可达fg／ml水平，特别适合于体液中含量甚微的抗原或抗体的检测。