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常用电泳分析技术

时间:2022-10-20 百科知识 版权反馈
【摘要】:醋酸纤维素薄膜电泳是以醋酸纤维素薄膜作为支持物的一项电泳技术。醋酸纤维素是将纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯,将其制成的薄膜,称为醋酸纤维素薄膜,简称醋纤膜。醋酸纤维素几乎不带电荷,吸附作用和电渗作用都很微弱。聚丙烯酰胺凝胶电泳是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种电泳技术。
常用电泳分析技术_生物化学检验技术

(一)醋酸纤维素薄膜电泳

醋酸纤维素薄膜电泳(CAE)是以醋酸纤维素薄膜作为支持物的一项电泳技术。醋酸纤维素是将纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯,将其制成的薄膜,称为醋酸纤维素薄膜,简称醋纤膜。醋酸纤维素几乎不带电荷,吸附作用和电渗作用都很微弱。醋纤膜微孔细小,质地致密,标本电泳速度快,区带整齐,分辨率高,几乎无拖尾现象。它不与染料着色,漂洗时染料易脱去,背景白净,区带易于观察。经冰醋酸-乙醇溶液透明可进行扫描分析,电泳区带可长期保存。

CAE适用于血清蛋白、血浆脂蛋白、甲胎蛋白、同工酶和核酸等分离分析。

(二)琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶电泳(AGE)是以琼脂糖凝胶作为支持物的一种电泳技术。琼脂糖是由琼脂分离纯化而得,其化学组成为D-半乳糖和3,6-脱水L-半乳糖。由于去除了硫酸根和羟基基团的琼脂胶,因此吸附作用和电渗作用大为降低;又因含水量大,近似自由电泳,故电泳速度快,区带分离清晰、整齐,是一种较好的电泳支持介质。琼脂糖透明无紫外吸收,电泳过程和结果可直接用紫外灯检测及定量测定;琼脂糖不与染料结合,染色后背景染料容易洗脱;凝胶可干燥制成薄膜,结果可长期保存。

AGE适用于血浆脂蛋白、免疫球蛋白、同工酶和核酸等分离。

(三)聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(Acr)单体和甲叉双丙烯酰胺(Bis)双体在催化剂(过硫酸铵)和加速剂(四甲基乙二胺,TEMED)作用下聚合交联而成的三维网状结构凝胶。由于聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的物质,可根据待分离物质的分子大小,在聚合前调整各单体的浓度比,选择最合适的凝胶成分,使之有适宜的孔径和较好的机械性能。凝胶中富含酰胺键,亲水性强;在溶液中不电离、不带电荷,吸附作用和电渗作用很小;而且对热的稳定性很好,受p H的影响较小;可以通过改变交联度调节孔径大小范围,凝胶无色透明,易于观察,能准确分离各蛋白质的组分,是一种理想的电泳支持物。

PAGE适用于蛋白质、酶、核酸等生物分子的分离、鉴定和定量,也可用于分子量和等电点的测定。

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