圆斑星鲽Ⅰα基因的克隆与组织表达分析

圆斑星鲽MHCⅠα基因的克隆与组织表达分析

圆斑星鲽MHCⅠα基因的克隆与组织表达分析⁽¹⁾

王　娟1，2　李宏俊2　刘　星1　苏　浩2　高祥刚2　赫崇波2　王宏伟3

（1．辽宁师范大学生命科学学院，辽宁大连，116029；

2．辽宁省海洋水产科学研究院，辽宁省海洋水产分子生物学重点实验室，辽宁大连，116023）

摘　要　采用表达序列标签法和cDNA末端快速扩增（RACE）技术，成功获得了圆斑星鲽MHCⅠα的全长cDNA序列。该cDNA全长2　171bp，5′UTR为20bp，3′UTR为1　053bp，开放阅读框（ORF）长度为1　098bp，可编码365个氨基酸，包含信号肽、抗原结合域（α1、α2），IGC类似区（α3），连接肽（跨膜区）和胞质区5个结构域。同源分析表明，圆斑星鲽MHCⅠα氨基酸序列与其他硬骨鱼具有31%～74%的同源性，与人的相似性较低。利用荧光定量PCR分析组织表达发现MHCⅠα基因在健康圆斑星鲽9种组织中均有表达，但表达量存在差异，肾的表达量最高，肌肉和皮的表达量最低。

关键词　圆斑星鲽；MHCⅠα；基因克隆与表达

主要组织相容性复合体（Major histocompatibility complex，MHC）是脊椎动物体内与机体免疫功能密切相关的一个基因家族，也是基因组中多态性最丰富的区域，不同个体间MHC多样性水平的不同可以导致个体对疾病的抗性和易感性的差异［1－3］，因此MHC作为抗病的候选标记受到动物遗传育种学家的高度关注。根据化学结构和功能的不同，MHC分子可分为MHCⅠ类分子和MHCⅡ类分子，在哺乳动物中还存在MHCⅢ类分子［4］。MHCⅠ分子是由α和β链非共价键结合组成的异二聚体，存在于所有有核细胞表面，主要与内源性抗原相结合，其中α链包括α1、α2和α3以及跨膜区和胞内区［5］，多态位点集中分布于α1、α2形成的抗原结合域［6］。

圆斑星鲽（Verasper variegatus），俗称花斑宝、花瓶片，自然分布于我国黄渤海和东海、日本北海道以南至九州沿海。其肉质鲜美，营养丰富，经济价值高［7］，深受广大消费者与养殖户的欢迎。近些年，国内学者先后对圆斑星鲽的生物学［1］、繁殖生物学［9－11］和分子生物学［12－15］等方面进行了研究，并取得重要进展，但圆斑星鲽抗病机制的研究尚未见报道。本研究通过大规模EST测序，结合RACE技术获得了圆斑星鲽MHCⅠα的全长cDNA序列，并分析了MHCⅠα的组织特异性表达，为进一步研究MHC基因的多态性与鱼体抗病力的关系奠定了基础。