中国对虾免疫信号通路相关基因克隆及表达分析

甲壳动物的免疫系统属于先天性免疫系统，机体受到外界病原刺激后通过激活不同基因编码的抗菌肽，体液中的各种蛋白酶或者吞噬作用等来抵御外界病菌侵染（Bachere，2000；Sderhll et al，1996）。在果蝇体内，Toll 通路和 Imd 通路调控着大约80%在抵御外界感染中起作用的基因，其中Imd信号通路主要通过产生抗革兰氏阴性菌的抗菌肽来发挥其抗菌作用（Manfruelli et al，1999；Lemaitre et al，2007；Rutschmann et al，2000）。由Imd基因编码的IMD蛋白，是一种含有死亡结构域的接头蛋白，在信号通路中起到传导信号分子的作用，当Imd基因发生突变成为突变体后机体则不能产生抵抗革兰氏阴性菌的抗菌肽（Wang et al，2009；Georgel et al，2001）。NF-κB是一类重要的核转录因子，位于下游信号通路的枢纽位置，它可以调节的蛋白包括细胞因子、趋化因子、免疫受体、转录因子、氧化应激相关酶等，参与炎症和免疫反应以及对细菌病毒感染的反应等，在进化上非常保守，其作用方式在脊椎动物和无脊椎动物中存在极大的相似性，在先天性免疫应答中起着核心作用（Busse et al，2007；Matova et al，2006）。当机体受到革兰氏阴性菌侵染时，细菌细胞壁的肽聚糖被Imd通路中的肽聚糖识别蛋白PGRP-LE和PGRP-LC受体复合体识别后活化接头蛋白IMD，引起信号级联反应激活NF-κB转录因子Relish，进入细胞核促使抗菌肽及其他免疫相关基因的表达，多酚氧化酶级联反应，还可以诱导iNOS等炎症因子启动炎症反应（Huang et al，2009；陈杨等，2010；阎慧等，2008）。

中国对虾是我国重要养殖虾类，但在其养殖环境中时常发现弧菌的存在，致使虾体出现红腿、烂鳃等现象，出现大面积死亡，对虾类养殖业造成严重损失。鳗弧菌（Vibrio anguillarum）属于革兰氏阴性菌，广泛存在于自然海水中，导致弧菌病的发生，且具有流行广、发病率高、危害大、死亡率高等特点，给鱼、虾、蟹及贝类等海水动物的养殖造成了巨大的影响。目前有关甲壳动物免疫信号通路的研究主要集中在通路中信号转导及转录激活因子，抗菌肽等单个基因的克隆及其表达，而针对一条通路的各关键位点联合起来的研究甚少（康翠洁等，2002；孙晨等，2011；Li et al，2009；李莉等，2011），葛倩倩等（2014）分析了中国对虾Imd基因和Relish基因的表达变化，结合中国对虾的累积死亡率变化情况探讨其抗菌免疫机制，为对虾弧菌病的防治提供一定理论依据。