胰岛素水平测定意义

一、概 述

胰岛素(insulin,IN)是一种多肽类激素,体内IN是由胰岛B细胞分泌的。其主要作用是促进肝、骨骼肌和脂肪组织对葡萄糖的摄取,使葡萄糖转换成糖原或脂肪储存,同时抑制肝的糖异生,刺激蛋白质合成并抑制蛋白质分解,总的效应是降低血糖。人IN与许多动物来源的IN在免疫学和生物活性上有相似性。

正常人口服葡萄糖后,随血糖的上升,血浆IN水平也迅速上升,高峰一般在服糖后1h出现且为空腹值的5～10倍,然后逐渐下降,至3h应接近空腹水平。

胰岛素释放试验与糖耐量试验常同步进行。

二、病人准备

1.药物

(1)长时间使用胰岛素样生长因子-Ⅰ的患者,在检测胰岛素水平时,应停用治疗药物,否则检测结果将显著降低。

(2)5-羟色胺(5-HT)可抑制胰岛素的分泌。

(3)乙酰乙酸盐给药后最长在40min之内胰岛素的检测结果偏高。

(4)患有银屑病(牛皮癣)且局部使用糖皮质激素的患者其胰岛素浓度升高2～3倍。

(5)使用Roche Elecsys 1010、2010分析仪或Roche MODULAR分析仪,虽然检测试剂具有相应的抗干扰能力,但在极少数情况下,高滴度的抗钌抗体和抗抗生蛋白连菌素抗体还是可以引起交叉反应导致结果偏高。

(6)使用放射免疫法检测胰岛素时,由于试剂盒不能区分胰岛素原和胰岛素原裂解产物,注射外源性胰岛素产生的胰岛素抗体可干扰胰岛素测定;正在使用胰岛素的病人,特别是中长效胰岛素,会影响测定结果(测定值包括了内源性胰岛素和外源性胰岛素),所以要同时测定C-肽水平。

(7)病人在确诊糖尿病后,用药一段时间,血糖控制在正常范围或接近正常范围,需进一步调整药物剂量时,一切按平时的饮食及用药情况进行。

(8)限制使用促肾上腺皮质激素,皮质甾类(包括激素避孕药),促甲状腺素药,肾上腺素和其他可能会影响试验结果的药物。如果这些药物必须持续使用,应在申请单上注明。

2.饮食

(1)一般试验前1d晚饭后禁食10～12h,禁食时间不可太长,如超过48h以上胰岛素水平降低15%。

(2)长期的低热量膳食(1 000～1 200cal)可使胰岛素水平显著降低。

(3)摄取食物导致胰岛素水平升高。

(4)整个试验过程中不可吸烟、喝咖啡、喝茶或进食。

三、标本采集

1.采集时间 试验前1d晚饭后禁食10～12h,次日清晨空腹采血,一般在8:30前采集空腹血,采血后病人根据血糖情况(经医师指导),定量进食(服含75g葡萄糖或吃100g面粉的馒头),从服糖或吃第一口馒头时算起,30min、60min、120min及180min分别取血标本;若无法多次取血,则仅取服糖后120min标本是必需的(本室是空腹及餐后60min、120min、180min各采血一次;根据情况可加测餐后30min的结果)。

采集静脉血2ml于普通试管(或含肝素的抗凝试管)中,整个试验完成后送检。

2.标本保存 实验室收到标本后离心分离血清或血浆,血清标本应在取血后5h内分离,所分离的血清中IN在室温下可稳定12h,在4℃可稳定1周,在-20℃可稳定1个月。

一般不使用溶血标本,因为红细胞中存在胰岛素降解酶,溶血标本可致IN效价降低,但低温可以防止血标本溶血。

四、注意事项

1.如已确诊为糖尿病,为了解胰岛功能可考虑用馒头餐试验;小孩服糖量按1.75g/kg体重计算,总量不超过75g。

2.患者在服糖后,若出现较重的无力、头晕、胃不适等症状,应及时处理,让患者平卧,并饮用少量温水,以缓解症状,必要时参照医师意见,可终止试验,次日改用馒头餐再采血。

3.高强度的锻炼运动可导致血浆胰岛素水平降低。

4.肥胖者胰岛素水平较高,且随体重降低而降低。

5.健康吸烟者的胰岛素平均浓度明显高于不吸烟者的平均浓度。

五、试验方法及正常参考范围

1.放射免疫分析法:用放射性碘(125 I)标记的IN与标本中的IN竞争结合胰岛素抗体上的结合位点,一般用纯化猪胰岛素刺激豚鼠获取试验所用的胰岛素抗体。125 I-Ins和抗体的结合量与标准或样品中IN的含量呈一定的函数关系(CPM)。用免疫分离试剂(PR)将结合部分(B)与游离部分(F)分离后,测定结合部分的放射性强度,并计算相应结合率B/B0。用已知标准胰岛素含量与对应结合率作图,即得标准抑制曲线。从标准曲线上查知对应结合率的待测样品中IN的含量。

正常参考范围 空腹血清胰岛素水平:5～25μU/ml。

2.化学发光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay assay,CLIA).待测抗原(IN)与鼠抗人IN单克隆抗体(m Ab)、碱性磷酸酶标记的羊抗IN抗体(ALP-g Ab)反应,IN的量越多,与m Ab和ALP-g Ab的结合量就越多。经洗涤吸弃废液后加入发光底物AMPPD,后者在ALP的作用下迅速发出稳定的光量子,光子的量与m Ab-Ins-ALP-g Ab的量(即Ins的量)成正比。

正常参考范围 空腹血清胰岛素水平:4.0～15.6U/L。

3.电化学发光免疫分析法(electrochemiluminescence immunoassay assay,ECLIA)。待测标本(IN)、生物素化的抗IN单克隆抗体与钌标记的抗IN另一位点单克隆抗体在反应体系中混匀,形成双抗体夹心抗原抗体复合物。加入链霉亲和素包被的磁性微粒捕获该免疫复合物,在磁场的作用下,磁性微粒被吸附至电极上,吸弃各种游离成分。电极加压后产生光信号,其强度与检样中一定范围的IN含量成正比。

正常参考范围 空腹血清胰岛素水平:17.8～173.0pmol/L。

六、临床意义

1.糖尿病分型 1型糖尿病;2型糖尿病;其他特殊类型的糖尿病。

2.低血糖综合征的鉴别诊断 反应性低血糖;胰岛细胞瘤;其他疾病包括引起低血糖综合征的疾病,例如,腺垂体功能减退、艾迪生病、严重肝病、恶病质等。