胰岛的分离与纯化

（一）胰岛的分离

从胚胎中取出胰腺，去除胰腺包膜、脂肪、血管和周围组织，然后采用机械分离法和胶原酶消化法分离制备胰岛。

1．机械分离法　即用锋利的剪刀将胰腺剪成约1mm3大小碎块，置RPMI－1640培养液中培养。此方法简单、方便，但机械性剪切可损伤胰岛结构，且未能将内、外分泌腺分离和进一步纯化胰岛。

2．胶原酶消化法　胰管内注入胶原酶后，或直接将胰腺剪碎成＜1mm3的碎块，漂洗后，加入一定浓度的胶原酶Hanks液，置于38℃水浴中振荡，然后用含1%白蛋白的Hanks液终止消化并清洗消化物，再用Ficoll密度梯度液离心，从而获得游离胰岛。此方法可比较彻底分离内外分泌腺，并可经纯化而获得纯度较高、质量较好的游离胰岛，但胰岛获得率较低，且消化酶可使胰岛活性下降。当前国际上多数胰岛移植中心采用Ricordi胰岛自动分离法进行胰岛分离，再进一步采用不连续密度梯度法进行纯化，其分离后胰岛的产量是手工分离法的3倍。

（二）胰岛纯化

经胶原酶消化分离制备的胰岛，可根据内外分泌腺密度不同，在不同密度的基质中分布亦有不同的原理，采用不连续密度梯度离心法，纯化胰岛。纯度可达30%～90%。也可在立体显微镜下用特制吸管手工挑选出胰岛，但产量很低。因植物血凝素能与外分泌组织结合，因此，可用结合植物血凝素的磁化小球结合外分泌组织，从而纯化胰岛。当前胰岛纯化过程可造成部分胰岛细胞的损失，使胰岛获得率下降，影响移植效果。有证据表明，胚胎胰外分泌部分经培养和植入宿主体内后可发生萎缩而达到自我纯化的作用。因此，有人认为无需进行纯化，但有人认为未纯化的胰岛，免疫原性较强，加重排斥反应，且如植入血运丰富部位有引起休克甚至死亡的危险。