食品中有机氯农药的测定

由于有机氯农药含有的Cl-具有电负性，可以采用气相色谱(gas chromatogrophy，GC)分离分析，用电子捕获检测器(electron capture detector，ECD)对电负性成分Cl-进行较高选择性和灵敏度检测。此方法适用于肉类、蛋类、乳类动物性食品和植物(含油脂)中a-HCH、六氯苯、β-HCH、γ-HCH、五氯硝基苯、σ-HCH、五氯苯胺、七氯、五氯苯基硫醚、艾氏剂、氧氯丹、环氧七氯、反式氯丹、α-硫丹、顺式氯丹、p，p'-滴滴伊(DDE)、狄民剂、异狄氏剂、β-硫丹、p，p'-DDD、o，p'-DDT、异狄氏剂醛、硫丹硫酸盐、p，p'-DDT、异狄氏剂酮、灭蚁灵的分析。

1.原理(GB/T5009.19—2008)

基于试样中有机氯农药组分的脂溶性及电负性强的特点，样品中有机氯农药经石油醚提取、凝胶色谱层析净化，用毛细管柱气相色谱分离，用电子捕获检测器检测，以保留时间定性，外标法定量。

2.试剂

①丙酮(CH3COCH3): 分析纯，重蒸;

②石油醚: 沸程30℃～60℃，分析纯，重蒸;

③乙酸乙酯(CH3COOC2H5): 分析纯，重蒸;

④环己烷(C6H12): 分析纯，重蒸;

⑤正己烷(n-C6H14): 分析纯，重蒸;

⑥氯化钠(Na Cl): 分析纯;

⑦无水硫酸钠(Na2SO4): 分析纯，置干燥箱中120℃干燥4h，冷却后，密闭保存;

⑧聚苯乙烯凝胶(Bio-Beads S-X3): 200目～400目，或同类产品;

⑨农药标准品: α-六六六(α-HCH)、六氯苯(HCB)、β-六六六(β-HCH)、γ-六六六(γ-HCH)、五氯硝基苯(PCNB)、σ'-六六六(σ'-HCH)、五氯苯胺(PCA)、七氯(heptachlor)、五氯苯基硫醚(p CPs)、艾氏剂(aldrin)、氧氯丹(oxychlordane)、环氧七氯(heptachlor epoxide)、反氯丹(trans-chlordane)、α-硫丹(α-endosulfan)、顺氯丹(cis-chlordane)、p，p'-滴滴伊(p，p'-DDE)、狄氏剂(dieldrin)、异狄氏剂(endrin)、β-硫丹(β-endosulfan)、p，p'-滴滴滴(p，p'-DDD)、o，p'-滴滴涕(o，p'-DDT)、异狄氏剂醛(endrin aldehyde)、硫丹硫酸盐(endosulfan sulfate)、p，p'-滴滴涕(p，p'-DDT)、异狄氏剂酮(endrin ketone)、灭蚁灵(mirex)，纯度均不低于98%。标准溶液的配制: 分别准确称取或量取上述农药标准品适量，用少量苯溶解，再用正己烷稀释成一定浓度的标准储备溶液。量取适量标准储备溶液，用正己烷稀释为系列混合标准溶液。

3.仪器

①气相色谱仪(GC): 配有电子捕获检测器(ECD);

②凝胶净化柱: 长30cm，内径2.3～2.5cm具活塞玻璃层析柱，柱底垫少许玻璃棉。用洗脱剂乙酸乙酯-环己烷(1+1)浸泡的凝胶，以湿法装入柱中，柱床高约26cm，凝胶始终保持在洗脱剂中;

③全自动凝胶色谱系统: 带有固定波长(254nm)紫外检测器，供选择使用;

④旋转蒸发仪;

⑤组织匀浆器;

⑥振荡器;

⑦氮气浓缩器。

4.分析步骤

1) 试样制备

蛋品去壳，制成匀浆; 肉品去筋后，切成小块，制成肉糜; 乳品混匀待用。

2)提取与分离

(1)蛋类

称取试样20g(精确到0.01g)于200m L具塞三角瓶中，加水5m L，再加入40m L丙酮，振摇30min后，加入Na Cl6g，充分摇匀，再加入30m L石油醚，振摇30min。静置分层后，将有机相全部转移至100m L具塞三角瓶中，经无水硫酸钠干燥，并量取35m L于旋转蒸发瓶中，浓缩至约1m L，加入2m L乙酸乙酯-环己烷(1+1)溶液再浓缩，如此重复3次，浓缩至约1m L，供凝胶色谱层析净化使用，或将浓缩液转移至全自动凝胶渗透色谱系统配套的进样试管中，用乙酸乙酯-环己烷(1+1)溶液洗涤旋转蒸发瓶数次，将洗涤液合并至试管中，定容至10m L。

(2)肉类

称取试样20g(精确到0.01g)，加水15m L。加40m L丙酮，振摇30min，其余步骤按照蛋类试样的提取、分离步骤处理。

(3)乳类

称取试样20g(精确到0.01g)，鲜乳不需加水，直接加丙酮提取。以下按照蛋类试样的提取、分离步骤处理。

(4)大豆油

称取试1g(精确到0.01g)，直接加入30m L石油醚，振摇30min后，将有机相全部转移至旋转蒸发瓶中，浓缩至约1m L，加2m L乙酸乙酯-环己烷(1+1)溶液再浓缩，如此重复3次，浓缩至约1m L，供凝胶色谱层析净化使用，或将浓缩液转移至全自动凝胶渗透色谱系统配套的进样试管中，用乙酸乙酯-环己烷(1+1)溶液洗涤旋转蒸发瓶数次，将洗涤液合并至试管中，定容至10m L。

(5)植物类

称取试样匀浆20g，加水5m L(视其水分含量加水，使总水量约20m L)，加丙酮40m L，振荡30min，加氯化钠6g，摇匀。加石油醚30m L，再振荡30min，其余步骤按照蛋类试样的提取、分离步骤处理。

3)净化

选择(1)或(2)任何一种方法进行。

(1)手动凝胶色谱柱净化

将试样浓缩液经凝胶柱以乙酸乙酯-环己烷(1+1)溶液洗脱，弃去0～35m L流分，收集35～70m L流分。将其旋转蒸发浓缩至约1m L，再经凝胶柱净化收集35～70m L流分，蒸发浓缩，用氮气吹除溶剂，用正己烷定容至1m L，留待GC分析。

(2)全自动凝胶渗透色谱系统净化

试样由5m L试样环注入凝胶渗透色谱(GPC)柱，泵流速5.0m L/min，以乙酸乙酯-环己烷(1+1)溶液洗脱，弃去0～7. 5min流分，收集7.5～15min流分，15～20min冲洗GPC柱。将收集的流分旋转蒸发浓缩至约1m L，用氮气吹至近干，用正己烷定容至1m L，留待GC分析。

4)测定

(1)气相色谱参考条件

色谱柱: DM-5石英弹性毛细管柱，长30m、内径0.32mm、膜厚0.25μm; 或等效柱;柱温: 采用程序升温，进样口温度: 280℃，不分流进样，进样量1μL; 具体升温程序如下:

检测器: ECD，温度300℃; 载气流速: 氮气(N2)，流速1m L/min; 尾吹，25m L/min; 柱前压: 0.5MPa。

(2)色谱分析

分别吸取1μL混合标准液及试样净化液注入气相色谱仪中，记录色谱图，以保留时间定性，以试样和标准的峰高或峰面积比较定量。

(3)色谱图

见图12-1。

5.结果计算

式中: X——试样中各农药的含量，单位为毫克每千克(mg/kg);

m1——被测样液中各农药的含量，单位为纳克(ng);

V1——样液进样体积，单位为微升(μL);

f——稀释因子;

m——试样质量，单位为克(g);

V2——样液最后定容体积，单位为毫升(m L)。

计算结果保留两位有效数字。

图12－1 有机氯农药混合标准溶液的色谱图

1—α-六六六; 2—六氯苯; 3—β-六六六; 4—γ-六六六; 5—五氯硝基苯; 6—δ-六六六; 7—五氯苯基硫醚;8—七氯; 9—五氯苯基硫醚; 10—艾氏剂; 11—氧氯丹; 12—环氧七氯; 13—反氯丹; 14—α-硫丹; 15—顺氯丹;16—p，p'-滴滴伊;17—狄氏剂;18—异狄氏剂;19—β-硫丹;20—p，p'-滴滴滴;21—o，p'-滴滴涕;22—异狄氏剂醛; 23—硫丹硫酸盐; 24—p，p'-滴滴涕; 25—异狄氏剂酮; 26—灭蚁灵

6.精密度

在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%，方法测定不确定度见表12-1。

表12－1 以六氯苯和灭蚊灵为目标化合物

7.检出限

该法测定的检出限随试样基质而不同，参见表12-2。

表12－2 不同基质试样的检出限 (单位: μg/kg)

续表12－2