【摘要】：样品中若含有一定量的RNA对测定影响不大，盐类对测定有影响，蛋白质、多糖类及其衍生物、芳香醛、羟基醛与二苯胺形成各种有色物质，干扰测定。吸取1mL，加二苯胺2.5mL，同上操作，用蒸馏水作空白。从标准曲线查出DNA量，再根据稀释倍数算出样品中DNA含量。
二苯胺法_生物化学实验
二、二苯胺法
（一）实验原理
DNA酸解后生成嘧啶核苷酸、嘌呤、磷酸及脱氧核糖。脱氧核糖在酸性条件下脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，可与二苯胺作用呈蓝色，在595nm有最大吸收值，待测样品浓度在50～500μg/mL DNA之间，吸光度与DNA的浓度成线性关系。样品中若含有一定量的RNA对测定影响不大，盐类对测定有影响，蛋白质、多糖类及其衍生物、芳香醛、羟基醛与二苯胺形成各种有色物质，干扰测定。其反应式如下：
（二）实验药品
二苯胺试剂：称取1g二苯胺溶于98mL冰醋酸中，加2mL浓硫酸，冰箱保存，供当天使用。
（三）实验方法
1．标准曲线的制作
取与被测样品相同来源的DNA纯化制品，用定磷法测定纯度、按纯DNA含量配成500μg/mL溶液。吸取0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL，补水到1.0mL，再加二苯胺试剂2.5mL，置沸水浴10min，冷水冷却后，用分光光度计在波长“595nm”下，以空白管调零，测定吸光度。以吸光度为纵坐标、纯DNA量（μg）为横坐标，绘制标准曲线。
2．样品中DNA测定
样品配成100～400μg/mL浓度。吸取1mL，加二苯胺2.5mL，同上操作，用蒸馏水作空白。从标准曲线查出DNA量，再根据稀释倍数算出样品中DNA含量。
（四）实验记录
1．标准曲线的绘制
2．实验记录
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