食品中甜蜜素的测定

甜蜜素的化学名称为环己基氨基磺酸钠，易溶于水，水溶液呈中性，几乎不溶于乙醇等有机溶剂，对酸、碱、光、热稳定。甜味好，后苦味比糖精低。但甜度不高，为蔗糖的40～50倍，因此用量大，容易超标使用。甜蜜素自面世以来对人体是否有害一直存在争议，在加拿大、东南亚、日本等国禁止作为食品添加剂使用，我国对甜蜜素的使用也有严格的规定，凉果类、果丹(饼)类≤8.0g/kg，糕点、配制酒、饮料等≤0.65g/kg。目前测定甜蜜素的方法有气相色谱法、薄层层析法、紫外分光光度法、盐酸萘乙二胺比色法等。

1.气相色谱法

1)原理

在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸酯，用气相色谱法测定，根据保留时间和峰面积进行定性和定量。

2)试剂

①层析硅胶(或海砂)。

②亚硝酸钠溶液(50g/L)。

③100g/L硫酸溶液。

④环己基氨基磺酸钠标准溶液: 准确称取1.0000g环己基氨基磺酸钠(含环己基氨基磺酸钠＞98%)，加水溶解并定容至100m L，此溶液每毫升含环己基氨基磺酸钠10mg。

3)仪器设备

气相色谱仪(附氢火焰离子化检测器)。

4)操作步骤

(1)样品处理

①液体样品。含二氧化碳的样品先加热除去二氧化碳，含酒精的样品加氢氧化钠溶液(40g/L)调至碱性，于沸水浴中加热除去乙醇。样品摇匀，称取20.0g于100m L带塞比色管，置冰浴中。

②固体样品。将样品剪碎称取2.0g于研钵中，加少许层析硅胶或海砂研磨至呈干粉状，经漏斗倒入100m L容量瓶中，加水冲洗研钵，并将洗液一并转移至容量瓶中，加水至刻度，不时摇动。1h后过滤，滤液备用。准确吸取20m L滤液于100m L带塞比色管，置冰浴中。

(2)色谱条件

①色谱柱: 长2m，内径3mm，不锈钢柱;

②固定相: Chromosorb WAWDMCS80～100目，涂以10%SE-30;

③测定条件: 柱温80℃; 汽化温度150℃; 检测温度150℃。流速为氮气40m L/min; 氢气30m L/min; 空气300m L/min。

(3)测定

①标准曲线绘制: 准确吸取1.00m L环己基氨基磺酸钠标准溶液于100m L带塞比色管中，加水20m L，置冰浴中，加入5m L亚硝酸钠溶液(50g/L)，5m L硫酸溶液(100g/L)，摇匀，在冰浴中放置30min，并不时摇动。然后准确加入10m L正己烷、5g氯化钠，摇匀后置漩涡混合器上振动1min(或振摇80次)，静置分层后吸出己烷层于10m L带塞离心管中进行离心分离。每毫升己烷提取液相当于1mg环己基氨基磺酸钠。将环己基氨基磺酸钠的己烷提取液进样1～5μL于气相色谱仪中，根据峰面积绘制标准曲线。

②样品测定: 在样品管中自“加入5m L亚硝酸钠溶液(50g/L)……”起依①标准曲线绘制中所述方法操作，然后将试样同样进样1～5μL，测定峰面积，从标准曲线上查出相应的环己基氨基磺酸钠含量。

5)结果计算

式中: X——样品中环己基氨基磺酸钠的含量，单位为克每千克(g/kg);

A——从标准曲线上查得的测定用试样中环己基氨基磺酸钠的质量，单位为微克(μg);

M——样品的质量，单位为克(g);

V——进样体积，单位为微升(μL)。

10——正己烷加入体积，单位为毫升(m L)。