(一)邻苯三酚红钼络合显色法
正常人尿蛋白定性检查为阴性,阳性时需进行尿蛋白定量检测,指导肾病的诊断、治疗及预后判断。尿蛋白定量同血浆蛋白定量测定一样,可采用双缩脲法、染料结合法、电泳法、磺基水杨酸-硫酸钠比浊法等。双缩脲法是测定蛋白质的经典方法,也是测定尿液总蛋白的常规方法,但主要缺点为灵敏度低,蛋白浓度较低时误差大,现已较少使用。邻苯三酚红钼络合显色法可用于测定尿液蛋白质,现已有可用于自动生化分析仪测定尿液微量总蛋白(M-TP)的邻苯三酚红钼法商品试剂盒。
(二)尿蛋白电泳
尿蛋白电泳(UPEP)可采用类似于普通SPE的方法。通常将尿液浓缩使蛋白质浓度到达30g/L以上,否则需要采用高灵敏的染色方法,如金染或银染。目前自动电泳仪采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),反复多次在琼脂糖凝胶上加样,无需浓缩尿液,经考马斯亮蓝染色可显示清晰的区带,得到初步的蛋白质类型。这种电泳具有较高的分辨率,能分离出Alb、α1、α2、β1、β2和γ球蛋白六条以上区带;由于病人的尿蛋白情况不同,时而区带不全显现(图6-5)。
参考区间:M-TP法,成年人30~130mg/24h;儿童<40mg/24h。
临床意义:尿液总蛋白增高见于急性肾炎、慢性肾炎、肾病综合征、系统性红斑狼疮、肾结核、肾结石、休克、感染等。还见于功能性蛋白尿,指泌尿系统并无器质性病变,尿内暂时出现蛋白质,如剧烈运动、长期直立或仰卧,过于激动、高热、高温与受冷等。
SDS-PAGE能将尿蛋白按分子量大小进行分离,从而判断为肾小球性、选择性和非选择性、肾小管性、混合性、溢出性蛋白尿,有助于疾病的诊断与治疗。
图6-5 尿蛋白SDS-PAGE图谱
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