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胰岛组织的保存及组织计量

时间:2022-04-08 理论教育 版权反馈
【摘要】:完成一次移植需收集几个甚至十几个供者胚胎胰,极为困难,因而提出胰岛组织的保存问题,由于采用RPM-I1640培养基进行胰岛细胞培养,80%以上的胰岛细胞胰岛素分泌功能至少可维持10d,因此,短期内细胞培养是目前最常用的胰岛组织保存方法,但培养保存技术比较高,不易掌握。目前正在研究-196℃冷冻长期保存胰岛,建立胰岛库的方法,发现冷冻复温后再培养,有80%的胰岛细胞恢复活性,但对葡萄糖刺激反应明显下降。

完成一次移植需收集几个甚至十几个供者胚胎胰,极为困难,因而提出胰岛组织的保存问题,由于采用RPM-I1640培养基进行胰岛细胞培养,80%以上的胰岛细胞胰岛素分泌功能至少可维持10d,因此,短期内细胞培养是目前最常用的胰岛组织保存方法,但培养保存技术比较高,不易掌握。实验研究发现,应用含1%PNS的RPMI-1640培养基,2~4℃保存整体胚胎胰腺可达144h,胰岛细胞低温(4℃)培养可延长培养保存时间。目前正在研究-196℃冷冻长期保存胰岛,建立胰岛库的方法,发现冷冻复温后再培养,有80%的胰岛细胞恢复活性,但对葡萄糖刺激反应明显下降。

供体胰岛的数量和质量与胰岛移植临床效果密切相关。正常人胰腺内约有200万个胰岛,一般损伤90%后方可发生糖尿病,故纠正糖尿病至少需要5万~10万个功能良好的胰岛。胰岛定量方法较多,表面活性染色排除试验是最常用的方法,用含0.04%曲利本蓝的等渗缓冲液,在室温下浸染胰岛细胞15min,再用克-林二氏碳酸氢盐缓冲液(KRΒ液)清洗数次,显微镜下观察计数未着色的细胞,即为活性细胞,通过计算可得知胰岛总量,另外可用卡巴棕胰岛染色法,也可通过测定锌含量或胰岛蛋白作为反映胰岛总量的指标。

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