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有关培养基及缓冲液配法

时间:2022-02-09 百科知识 版权反馈
【摘要】:除菌后的1640培养基,加入1ml双抗和10ml小牛血清,塞紧橡皮塞后置4℃保存备用。无菌分装小瓶,每瓶5ml,低温冻结保存。
有关培养基及缓冲液配法_病毒生物实验

一、有关培养基及缓冲液配法

1.1640培养基

(1)加1640培养基(RPMI)一包于2000ml三角瓶中,加入950ml双蒸水充分摇匀使1640溶解,加入2.0gNaHCO3调节pH值至低于工作pH值0.2~0.3 (用1mol/LNaOH或1mol/L HCl定容至1000ml。

(2)将溶解后的1640抽滤除菌,分装于100ml培养瓶(或三角瓶)中,每瓶90ml。

(3)除菌后的1640培养基,加入1ml双抗和10ml小牛血清,塞紧橡皮塞后置4℃保存备用。

2.Hank's液配制

无Ca2+、Mg2+Hank's液

NaCl         4.5g

KCl          0.2g

NaHCO3       0.175g

Na2HPO4·12H2O   0.076g

KH2PO4        +0.03g

葡萄糖        0.5g

0.4%酚红      +2.5ml

将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中,最后补加双蒸水至500ml,以5.6%NaHCO3调整pH值至7.4,4℃冰箱保存备用。

3.0.4%酚红溶液配制

酚红           0.4g

0.1%NaOH溶液       11.28ml

将酚红置于研钵中,加磨边缓缓加NaOH溶液,直到所有颗粒完全溶解,置于至100ml量杯中,最后加双蒸水至100ml,摇匀后,保存于4℃冰箱内备用。

4.Hank's液(原液)

原液甲:NaCl               160g

KCl                    8g

MgSO4·7H2    O2g

MgCl2·6H2    O2g

上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。

CaCl2     2.8g溶于100ml双蒸水

上述二液混合,加双蒸水至1000ml,再加2ml氯仿防腐,4℃保存。

原液乙:Na2NPO4·12H2       O3.04g

    KH2PO4                 1.2g

    葡萄糖                             20g

    加入800ml双蒸水,溶解。

    0.4%酚红溶液100ml

上述二液混合,加双蒸水至1000ml,再加2ml氯仿防腐,4℃保存。

使用时原液甲、原液乙按下列比例配成Hank's液使用液:原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份过滤,55.16kPa (8磅/平方吋)20min灭菌,放4℃冰箱保存,使用前用NaHCO3调整pH值。

5.MEM培养液

MEM培养基一袋,加1000ml双蒸水,过滤除菌或高压灭菌,分装于100ml盐水瓶中,每瓶90ml,用前以7%NaHCO3调pH值到7.2~7.4,并加10%犊牛血清。

6.双抗配制

青霉素            100万IU

链霉素               1g

Hank's液            100ml

将青霉素、链霉素溶解于100ml Hank's溶液中,此为双抗溶液,无菌操作,分装小瓶,每瓶中1ml内含有青霉素10000IU、链霉素10000μg,低温冻结保存。

使用时每100ml营养液中加双抗1ml,即每1ml营养液中含青霉素100IU、链霉素100μg。

7.0.25%胰蛋白酶配制

胰蛋白          0.25g

Hank's液         100ml

将胰蛋白酶溶于Hank's液中,待完全溶解后,用0.2μm滤膜过滤,检验无菌后才能使用。无菌分装小瓶,每瓶5ml,低温冻结保存。使用时以7%NaHCO3调节pH值到7.6~7.8。

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