常用培养基的制备

实训二　常用培养基的制备

一、目的要求

掌握一般培养基制备的方法及其酸碱度的调节。

二、仪器及材料

高压蒸汽灭菌器、电炉、天平、量筒、漏斗、三角瓶、烧杯、精密pH试纸、玻璃棒、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂粉、5％盐酸、5％氢氧化钠、牛皮纸、线绳、试管、试管塞、三角瓶塞等。

三、方法与步骤

制备培养基的几个步骤：称量、溶解、调pH、过滤、分装、包扎、高压灭菌（不同培养基的灭菌温度和时间不同，通常为15磅压力即121.3℃下20～min）。

（一）普通肉汤培养基

牛肉膏0.g，蛋白胨g，氯化钠0.g，蒸馏水mL。加热溶解后，取精密pH试纸一条，用玻璃棒蘸取培养基滴于其上，显色后与标准比色卡比较，根据酸碱度用盐酸或氢氧化钠调整至要求的范围内。调整pH为7.4～.6，过滤分装，包扎（双层报纸或牛皮纸），121.3℃灭菌20～min。该培养基可供一般细菌生长。

（二）普通营养琼脂培养基

普通肉汤mL，琼脂粉1.5～g（或者按量直接称取各种成分后加蒸馏水），煮沸溶解后（此过程中需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失的水分），调整pH为7.4～7.6，过滤分装试管（试管高度的1/5～1/4，摆高层斜面可分装1/3～1/2）或三角瓶（不超过体积的1/2），包扎，121.3℃灭菌20～min。试管可摆成斜面或高层斜面，三角瓶的培养基可倒成平板。该培养基可供一般细菌的分离培养，纯培养或保存菌种。

（三）鲜血琼脂培养基

将灭菌的普通营养琼脂培养基冷至45～50℃，以无菌操作加入10％的无菌血（或抗凝血）后，倾注平板即成血平板。做此培养基需掌握好普通培养基的温度，通常以能握住三角瓶不感到烫手即可加入血液。加入血液后应立即轻轻摇匀并马上倒平板。

试剂公司有售各种培养基成品，按照说明称量溶解灭菌即可。

培养基的分装与斜面的摆法见图1及图2。

图1　培养基的分装

图2　斜面的摆法