菌种培养基的制作

时间：2022-11-17 百科知识版权反馈

【摘要】：培养基是根据食用菌生长繁殖过程中所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。因此，培养基应当有食用菌需要的营养成分。食用菌的菌种根据培养阶段的不同，分为母种、原种和栽培种，所使用的培养基及其配制方法也有所不同。现以适用于多种食用菌的PDA培养基为例加以介绍。然后贴上标签，注明培养基名称及配制日期。搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管有塞的一头搁在长玻璃棒或木条上即可。

实训项目二　菌种培养基的制作

一、目的要求

掌握菌种培养基的配制方法。

二、实训原理

培养基是根据食用菌生长繁殖过程中所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的营养基质。因此，培养基应当有食用菌需要的营养成分（包括碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水）。食用菌的菌种根据培养阶段的不同，分为母种、原种和栽培种，所使用的培养基及其配制方法也有所不同。

三、实训器材

土豆、棉子壳、葡萄糖、蔗糖、石膏、琼脂、天平、台秤、试管、漏斗、量筒、烧杯、纱布、棉花、电炉、玻璃棒，塑料盆、灭菌锅、塑料袋（或菌种瓶）、牛皮纸、线绳等。

四、实训内容

（一）母种培养基的制备

现以适用于多种食用菌的PDA培养基为例加以介绍。PDA培养基的配方为：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000mL，pH自然。

（1）称量：按培养基的配方准确称取各成分。将马铃薯洗净挖芽去皮后，称取200g。

（2）配制：将马铃薯切成小薄片。放入烧杯中，加水1000mL，煮沸20～30min至马铃薯酥而不烂时，用6～8层纱布过滤，取滤液。加入琼脂加热使其全都熔化后，再加入葡萄糖，补足失水，搅拌均匀。

（3）分装：根据实验需要，可将配制好的培养基分装入试管或三角瓶内。装入试管的量为试管高度的1/5～1/4，装入三角瓶的量约为其体积的1/2。注意不要使培养基沾污管（瓶）口，以免浸湿棉塞，引起污染。

（4）加塞：培养基分装完毕，应在管（瓶）口塞上棉塞，以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。

棉塞的作用，一是防止杂菌污染，二是保证通气良好。因此，棉塞质量的优劣对实验结果有很大的影响。要求棉塞的形状、大小、松紧与试管（或三角瓶）口完全适合，过紧则妨碍空气流通，操作不便；过松则达不到滤菌的目的。加塞时，棉塞总长的2/3应在管内，1/3应在管外。做棉塞的棉花要选用纤维较长的，一般不用脱脂棉做棉塞，因为它易吸水变湿造成污染，而且价格也较贵。

（5）包扎：塞好棉塞后，每7～10支试管扎成1把，用牛皮纸包住，用线绳扎紧。然后贴上标签，注明培养基名称及配制日期。牛皮纸可防止灭菌时冷凝水沾湿棉塞和灭菌后灰尘侵入。

（6）灭菌：将上述培养基放入高压蒸汽灭菌锅内，0.105MPa灭菌20min，如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂时保存。

（7）搁置斜面：将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右，将试管有塞的一头搁在长玻璃棒或木条上即可。搁置的斜面长度以不超过试管总长的1/2为宜。

（8）无菌检查：将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h，无菌生长，方可使用。

（二）原种和栽培种培养基的配制

原种和栽培种培养基配方及制作方法大致相同，在此合并阐述，并以下列配方为例加以介绍。

（1）棉子壳培养基：棉子壳77%、麸皮20%、蔗糖1%、石膏粉1%、石灰1%。

（2）杂木屑培养基：杂木屑77%、麸皮20%、蔗糖1%、石膏粉1%、石灰1%。

（3）棉子壳综合培养基：棉子壳47%、杂木屑30%、麸皮20%、蔗糖1%、石膏粉1%、生石灰1%。

配制主要步骤如下。

（1）称量：按配方准确称取各成分。

（2）拌料：将糖溶于适量水中，将棉子壳、麸皮、石膏粉放入塑料盆中进行混合，然后加入糖水拌匀，使料的含水量达60%～65%，用手测试培养基的含水量，以手捏成团指缝有水渗出但不下滴为宜。