一、菌株选择
大肠杆菌菌株可根据菌体表面糖蛋白成分（O 抗原、H 抗原、K 抗原等）进行分类，用于分子生物学实验的菌株主要来自K12，常用菌株名称及其主要特征见表3-1，根据实验目的及载体种类选择相应菌株。
表3-1 常用大肠杆菌菌株及特征
二、大肠杆菌培养所需物品
（1）无菌超净工作台。
（2）液体培养基或固体培养基。
（3）微量移液器。
（4）枪尖盒。
（5）涂布棒或接种环或牙签。
（6）油性记号笔。
（7）酒精灯或煤气灯。
（8）冰箱。
（9）70%乙醇。
（10）抗生素[氨苄西林（氨苄青霉素）等]。
抗生素储液的配制：无菌水溶解抗生素后，吸入注射器的针筒内→在注射器嘴上安装微量过滤器→按每份1ml量分装到EP管中，保存于－20℃冰箱。
各种抗生素储液浓度及工作浓度见附录 A。
三、灭菌
灭菌是用理化方法杀死物质中微生物的微生物学基本技术。大肠杆菌生长的环境也适合其他细菌的生长，因此，培养大肠杆菌的所有试剂及器皿等均应灭菌。灭菌是获得纯培养的必要条件。培养大肠杆菌过程中用到的灭菌方法如表3-2所示。
表3-2 各种灭菌方法比较
四、培养基必备条件及种类
（一）培养基必备条件
培养基是人工配置的供给细菌或其他微生物生长繁殖的营养基质。作为培养基必须具备下列条件。
1．含有适当的水分和一定配比的适宜的营养物质。
2．有适当的物理状态：液体培养基、固体培养基和半固体培养基。
3．具有合适的酸碱度（pH）。
4．培养基必须经灭菌达无菌状态后方能应用。
（二）培养基种类用途
见表3-3。
表3-3 各种培养基的比较
显色培养基是一类利用微生物自身代谢产生的酶与相应显色底物反应显色的原理来检测微生物的新型培养基。这些相应的显色底物是由产色基因和微生物部分可代谢物质组成，在特异酶作用下，游离出产色基因，游离出一定颜色，直接观察菌落颜色即可对菌种做出鉴定。它是一种新型分离培养基，利用显色培养基进行微生物的筛选分离，其反应的灵敏度和特异性大大优于传统培养基。
五、培养基的配制
培养基配制的基本流程如下所示
（一）平板固体培养基的配制
【材料】
1．试剂 LB培养基所需的试剂：胰蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，NaCl 10g，琼脂粉 15g。
2．物品 搅拌器及搅拌转子、药匙、1L三角瓶、铝箔纸或牛皮纸、煤气灯或酒精灯、水平台面、直径9cm培养皿。
【操作步骤】
（二）斜面固体培养基的配制
【材料】
1．试剂 LB培养基所需的试剂：胰蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，NaCl 10g，琼脂粉 15g。
2．物品 搅拌器及搅拌转子、药匙、1L三角瓶、铝箔纸或牛皮纸、煤气灯或酒精灯、试管、试管架。
【操作步骤】
（三）半固体培养基的配制
把少量的凝固剂加入液体培养基中，就制成了半固体培养基。以琼脂为例，它的用量在0.2%～1%。这种培养基有时可用于观察微生物的动力，有时用于保藏菌种。
【材料】
1．试剂 LB培养基所需的试剂：胰蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，NaCl 10g，琼脂粉 5g。
2．物品 搅拌器及搅拌转子、药匙、1L三角瓶、铝箔纸或牛皮纸、煤气灯或酒精灯、试管、试管架
【操作步骤】
（四）小体积液体培养基的配制
以配制1L分装成2 ml为例。
【材料】
1．试剂 LB培养基所需的试剂：胰蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，NaCl 10g。
2．物品 搅拌器及搅拌转子、连续式分装器、药匙、试管及配套瓶塞、1L烧杯。
【操作步骤】
（五）大体积液体培养基的配制
以配制1L为例。
【材料】
1．试剂 LB培养基所需的试剂：胰蛋白胨 10g，酵母提取物 5g，NaCl 10g。
2．物品 搅拌器及搅拌转子、药匙、2L三角瓶、铝箔纸或牛皮纸。
【操作步骤】
【注意事项】
1．一般培养基的装量不宜超过容器体积的2/5，以免加热时溢出。
2．凝固剂琼脂一般不为细菌所利用。由于各地的琼脂质量不同，用时天气冷热不一，培养基的pH高低不同，所以琼脂用量可以适当改变。
附注：培养基的检定
为了确保培养基的使用效果，配制好的培养基应做检验以确定所配制培养基的质量是否合格。
1．一般性状检查 一般性状包括培养基的颜色、澄清度、pH等是否符合要求。固体培养基还要检查其软硬度是否适宜。
2．无菌检查 无论是经过高压蒸汽灭菌，或是无菌分装的培养基，均应做无菌试验，合格的方可使用。通常将配制好的培养基于37℃ 培养，过夜后，观察是否有细菌生长，如果没有视为合格。
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