动物细胞培养常用设备的使用

项目一　动物细胞培养常用设备的使用

一、项目背景

要完成动物细胞的培养工作，细胞培养实验室必须满足：①符合无微生物污染和其他有害因素影响的条件；②能提供维持细胞正常生长的环境；③有容纳无菌器材、培养用液和培养液、冷冻保存细胞等的设施。因此，一个细胞培养实验室应配备以下常用设备：足够数量的超净工作台、CO₂培养箱、电热干燥箱、离心机、水纯化装置、高压灭菌器、倒置显微镜、冰箱、液氮容器等。一个细胞培养工作者，不仅要会合理、安全地使用这些设备，还需经常保持这些设备的清洁，及时清理污染源，避免造成整个实验环境的污染，这是开展细胞培养工作的基础。

二、项目目标

（1）熟悉细胞培养实验室常用的各种仪器设备，明确各设备的功能；

（2）会安全、规范地使用各种仪器设备；

（3）熟知各种仪器设备的日常维护工作，能独立处理简单的仪器故障；

（4）明确细胞培养实验室的规章制度与实验要求。

三、工作流程

流程一：工作准备

续表

流程二：操作方法

按照细胞培养实验室的功能，把设备分为清洗、灭菌、操作、培养观察、保存等五部分；把学生对应分为五大组，由组长负责，每个仪器作为一个工作站；学生未接触过的新设备，由老师详细讲解、演示；其他课程已经使用过的仪器，由学生自己讲解操作，在规定的时间内要求每一组同学会安全、规范地完成每一种仪器设备的操作过程。

每种仪器设备的使用方法和注意事项应根据本实验室所具备的仪器设备型号而定，具体操作和注意事项可参考本教材模块一项目二之任务一。

流程三：实验室的整理与物品归位

实验结束后，应将实验用器材整理归位、摆放整齐，做好实验场地的卫生。

四、工作注意事项

（1）在正式工作之前，告知每一位同学工作结束后要对工作过程与工作综合表现进行双重考核，各组组员要做好互相监督工作，要公平、客观地为每一位合作成员作出评价。

（2）学生在其他课程已经学习、会使用的设备由学生讲解，细胞培养所需的专用设备由教师讲解。

（3）为防止发生在某一站人员堆积等候的现象，可安排不同的组从不同的站点开始工作。

五、思考题

（1）如何正确使用超净工作台？有哪些使用注意事项？

（2）如何进行CO₂培养箱的供气调节和消毒？

（3）试述高压蒸汽灭菌器的使用方法。存放物品和消毒时有何要求？

（4）在动物细胞培养的过程中，需要用到哪些仪器设备？其功能分别是什么？

项目二　酸液的配制及酸缸的使用

一、项目背景

细胞培养是否成功与所用培养器皿的清洁状况具有直接关系。为了保障清洗效果，有些器皿常常需要用清洁液清洗，清洁液也常称为酸液。清洁液去污能力很强，是由重铬酸钾、浓硫酸和蒸馏水按一定比例配制而成，对玻璃器皿的腐蚀作用不太明显，而其强氧化作用可除掉刷洗不掉的微量杂质，是清洗过程中关键的一环。酸液的配制与酸缸的使用是细胞培养清洗工作的第一步。

二、项目目标

（1）熟知清洁液的组成、特性；

（2）会配制清洁液，明确清洁液配制的注意事项；

（3）会安全使用清洁液进行清洗工作。

三、工作流程

流程一：工作准备

流程二：清洁液配方

流程三：操作方法

1.酸液的配制

（1）常用清洁液配方为重铬酸钾100g，浓硫酸200mL，蒸馏水800mL；

（2）按配方称量好重铬酸钾和蒸馏水，然后将重铬酸钾完全溶于蒸馏水中（用玻璃棒搅拌或用电磁炉加热助溶）；

（3）缓缓加入浓硫酸，边加边搅拌，切忌过急，否则将导致溶液过热而发生危险（绝不可将重铬酸钾液倒入浓硫酸中）；

（4）自然冷却、备用。

配制清洁液时，操作者必须小心、认真，戴耐酸碱手套和防护眼镜，避免酸液溅出伤及皮肤。

新配制的清洁液呈棕红色。当使用时间过长，清洁液颜色变暗、发绿或变混浊时，应弃去（深埋地下），配制新的清洁液。配制、盛装清洁液的容器应防酸、耐热、有较大的开口，一般用瓷缸、玻璃制品或耐酸塑料制品。目前细胞培养实验室都使用一种专用耐酸塑料容器。

2.酸缸的使用

（1）将酸缸的内缸取出，放置于外缸的支架上，沥干酸液；

（2）将干燥后的玻璃器皿放入内缸，缓缓将内缸放入酸液中，浸酸物品应完全被充满和覆盖，不能留有气泡。

流程四：物品的清洗与归位、实验室的整理等

实验结束后，应将实验用器材根据情况进行清洗、整理归位、摆放整齐，打扫实验场地的卫生。

四、工作注意事项

（1）本项目所用的浓硫酸、重铬酸钾或重铬酸钠均为危险性化学药品，在工作之前教师一定要告知学生不正确操作的危险性；

（2）加入浓硫酸时，为确保安全，由任课教师或实践指导教师完成，学生在旁边观摩即可；

（3）在溶解重铬酸钾或重铬酸钠的过程中，不要加热过度，以防止重铬酸钾或重铬酸钠溶液外溢；

（4）一般实验室需配制的清洁液量较大，配制时要反复多次溶解重铬酸钾或重铬酸钠药品，故在配制过程中一定要做好重铬酸钾或重铬酸钠溶液入酸缸的记录，以便最后确定浓硫酸的添加量；

（5）清洁液配制完毕后，从每一组抽取一名同学完成培养瓶、移液管、培养皿等玻璃器皿的浸泡工作。

五、思考题

（1）配制清洁液时的注意事项有哪些？

（2）清洁液的配制方法是什么？

（3）简述器皿浸酸的注意事项。