食用菌母种培养基的制作技术

实训三　食用菌母种培养基的制作技术

学习目标

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知识目标

◎了解食用菌母种培养基的配方；熟悉PDA培养基的配制方法；了解高压蒸汽灭菌锅的构造，掌握正确使用高压蒸汽灭菌锅的方法；学会棉塞的制作方法。

技能目标

◎能熟练配制PDA培养基。

一、材料及用具

（一）配制培养基材料

马铃薯、葡萄糖（或蔗糖）、琼脂、水等。

（二）仪器用具

电式自动控制高压蒸汽灭菌锅（手提式或立式）、电磁炉、不锈钢锅（30cm）、汤勺、切刀、切板、量杯、纱布、漏斗（带胶管和玻璃管）、止水夹、漏斗架、试管（20mm×200mm）、1cm厚的长方形木条（摆放斜面时垫试管用）、棉花（未脱脂）、捆扎绳、标签、天平等。

二、实训内容

PDA试管斜面培养基的制备。

三、实训步骤

（一）PDA培养基配方

马铃薯200g，葡萄糖（或蔗糖）20g，琼脂15～20g，水1000mL，pH自然。

（二）母种培养基的配制工艺流程

1.配制

先将马铃薯洗净，挖芽去皮，准确称取200g，然后将马铃薯切成玉米大小的颗粒或薄片。用量杯量取1000～1200mL水于不锈锅内煮马铃薯，待水沸后计时20～25分钟，当马铃薯酥而不烂时，用双层纱布过滤于量杯中，洗净锅滤渣，将滤液倒回锅中继续以文火加热，加入葡萄糖（或蔗糖）和琼脂，待琼脂溶化，不断搅拌，以免糊锅，注意补足水量。

2.分装

将熬成的培养基保持文火，趁热分装。将培养基加入漏斗中，左手握2～5支试管，右手持漏斗下面的玻璃管入试管口内，同时放开止水夹，让培养基逐个流入试管内，培养基高度为试管长度的1/5～1/4，10～15mL，注意避免将培养基沾在试管口内外。分装后的试管，在培养基凝固前必须立放。

3.制棉塞

用叠放式将未脱脂棉做成棉球，塞入试管口，管口内棉塞底部要求光滑，棉塞侧面要求无褶皱，棉塞长度的2/3在管口内，1/3在管口外。棉塞的松紧以手提棉塞轻晃试管不滑出为度。

4.捆把

以10支试管为一捆，用捆扎绳扎紧。贴上标签，准备灭菌。

5.灭菌

高压灭菌锅加水→灭菌物入锅→上盖→对称、均匀地拧紧螺栓→加热升温→压力至0.5kg/cm²时，打开排气阀排除锅内冷空气，压力降至零，温度达到121℃时，开始调火稳压25～30分钟，然后灭火，自然降压到压力为0.5kg/cm²，可慢慢打开排气阀徐徐降压至零（若降压太快，试管中的培养基易沸腾浸湿棉塞），后将锅盖半开，让锅内多余蒸汽逸出，锅内的余热烘干棉塞，最后开盖。

6.摆斜面

取物后摆斜面，斜面试管上应覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。

7.灭菌效果的检验

将凝固的斜面培养基放入37℃温箱培养2~3天，若光滑无杂菌生长，即可待用。

四、考核评价

（1）试述PDA培养基的制备过程。

（2）怎样正确使用高压蒸汽灭菌锅对培养基进行灭菌？

（3）灭菌前为什么要将锅内空气排尽？

（4）灭菌完毕后为什么要待压力降至零时才能打开放气阀和开盖取物？