食用菌菌种的组织分离技术

实训五　食用菌菌种的组织分离技术

学习目标

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知识目标

◎了解菌种的来源，食用菌组织分离是食用菌生产中的重要环节之一。

◎明确食用菌组织分离在食用菌生产中的重要性。

技能目标

◎掌握食用菌组织分离的方法和实际操作技术。

一、材料及用具

试管斜面PDA培养基、平菇较成熟的子实体、接种针、酒精灯、75%酒精、升汞、火柴以及恒温培养箱、无菌操作台、解剖刀等。

二、准备工作

（一）接种环境的处理

1.接种箱的熏蒸

先用2%来苏水清洁接种箱内外，放入接种所需的物品，用甲醛熏蒸。每立方米空间一般用甲醛10mL，加高锰酸钾（5~7g）使甲醛氧化挥发。先将高锰酸钾放入接种箱内的容器中，再注入甲醛，立即产生强烈刺激的甲醛气体。熏蒸时间至少保持30分钟以上。

2.超净工作台的消毒

用消毒液擦拭台面后放置接种所需物品，开启超净工作台上的紫外线灯，照射20分钟后使用。

（二）接种工具

镊子、解剖刀、接种铲。

（三）分离材料

1.选菇

平菇选朵大肉厚的做种菇。

2.种菇的消毒

将选好的种菇剪去过长的菌柄，放入接种箱内进行消毒。种菇均用75%的酒精擦洗菌盖、菌柄。

三、组织分离

（1）先用肥皂洗手，再用75%酒精棉球擦手，后将双手伸进接种箱操作孔。

（2）点燃酒精灯，烧灼接种工具并冷却。

（3）用无菌解剖刀从菌柄中部纵向切开，或把种菇撕开，在菌盖与菌柄交界处或菌盖带菌褶部分挑取一小块组织，移接到试管PDA培养基上，塞好棉塞，按要求贴上标签并注明各项内容。

（4）置23℃～25℃温度下培养3～7天可看到组织上产生白色绒毛状菌丝，并向培养基上生长。菌丝长满斜面后，管口用塑料薄膜或防潮纸包扎，即可放入5℃电冰箱中保藏。注意在培养期间经常检查，发现污染及时清除。