食用菌的组织分离法

实训31　食用菌的组织分离法

一、实训目的

（1）了解食用菌组织分离的原理。

（2）掌握组织分离的操作方法。

（3）制备出栽培用菌种。

二、实训原理

分离纯菌种是制种工作的首要环节，也是一项比较细致的工作。食用菌菌种的分离方法有三种：组织分离、孢子分离、菇木分离。

组织分离是采用食用菌子实体的组织块来培养母种的方法。食用菌的子实体是组织化了的纯菌丝体，再生能力强。因此，只要在无菌的条件下，切取一小块子实体的组织块，将其移植于适宜的培养基上，适温培养即能迅速生长，获得纯菌丝体。用组织分离法得到的菌丝体，属于无性繁殖，菌丝双核，遗传性比较稳定，后代不易发生变异，能保持原有菌种的优良特性。因此，用组织分离法得到的纯菌丝体，经过生产试验证明性状优良，即可做母种使用。组织分离法取材广泛，方法简便而又易获得成功，是菌种分离中最常用的方法，也是野外采种时常用的方法，适合广大基层或个人进行分离获取菌种。

三、实训器材

1．材料

PDA培养基斜面，新鲜子实体（平菇、香菇、草菇等）。

2．器具

酒精灯，试管架，解剖剪，解剖刀，镊子，试管斜面，75%酒精，酒精棉球，无菌水，培养皿，接种箱，培养箱等。

四、实训步骤

1．种菇的选择

要选择优良品系的优良个体，以肉厚肥大、鲜嫩、出菇早、菇形整齐且无病虫害、适度成熟（七、八成熟）的子实体做分离材料。

2．分离过程

（1）消毒处理：将种菇表面用清水冲洗干净，放在接种箱（或无菌室内）进行表面消毒。用镊子将种菇放在培养皿内，用另一镊子夹75%酒精棉球，对种菇进行表面消毒。

应注意，75%酒精棉球的酒精含量不宜过多，以防酒精渗入菌肉组织导致分离失败。

（2）接种：用解剖刀或解剖剪蘸酒精进行火焰消毒，冷却后把已消毒的种菇纵向切开，也可用手撕开，然后用已经灭菌的解剖刀在菌盖与菌柄交界处，切取长度为0．3～0．5 cm（绿豆大小）的菌肉组织块，用接种针移到斜面培养基上（图3－32）。

（3）培养：置25℃恒温箱中培养，每天检查试管斜面菌落生长情况，如从分离的菌肉组织块上长出正常的白色菌丝，即分离成功，及时将生长出来的菌丝转移到新的试管斜面。若在组织块附近或其他地方出现其他颜色杂菌生长应予以淘汰。

（4）移接：将组织块上长出的菌丝（未被污染的）挑取边缘处菌丝移植到新的培养基上培养，这样反复2～3次，即可获得母种。

图3－32　菇类组织分离

1—切取部位；2—挑取组织块；3—接入斜面；4—培养

五、结果记录

观察分离菌种的生长状况并记录到表3－23。

表3－23　分离菌种的生长状况观察

＊生长状况描述如未长出菌丝、有杂菌污染、长出浓白菌丝等。

六、思考题

（1）分析导致各种结果的可能原因。

（2）试述组织分离的方法步骤、体会和注意事项，观察记录斜面菌落生长速度和成功率，对比优良母种标准，以确定分离是否成功。