培养基制作

二、培养基制作

1.称量和配制

先按配方准确称取易溶物质，置于烧杯或搪瓷杯等容器内(不用铜、铁器皿，以免铜、铁锈混入培养基)，加入总量1/4～1/3的清水搅成糊状。难溶物质按配方称取后加适量清水，加热并不断搅拌使其溶解;微量元素和生长素因需要量少难以准确称取，可称取一定量先溶解调成高浓度母液，再按比例换算后从中取出需要的用量。

去皮挖芽眼切块的马铃薯、阔叶树木片、阔叶硬杂木屑及洋葱等物质，按配方称后放入容器内，加清水1000毫升，文火煮沸20～30分钟，然后用4～6层湿纱布过滤取汁。玉米粉称后加1000毫升清水搅拌均匀，并加热至70℃保持60分钟，再用湿纱布过滤取汁，最后补足水量至1000毫升。在配制合成培养基过程中，为了避免产生沉淀，造成营养损失，应严格按照先加缓冲化合物，溶解后再加主要元素，然后加微量元素，最后加维生素和生长素的加料顺序进行配制。每种营养成分溶解后再加入第二种营养成分。如果各种成分均不产生沉淀，也可一起加入。如果需要培养基清亮透明，可将溶化好的培养基用湿纱布趁热过滤。

2.测定和调整酸碱度

培养基溶液的酸碱度用pH来表示，pH是溶液中氢离子浓度的负对数。由于纯水的氢离子浓度为10^－7克分子，它的pH为7，所以pH等于7的溶液为中性。pH大于7为碱性，pH小于7为酸性。每种食用菌只能在一定pH范围内生长。细菌和放线菌喜欢中性偏碱(pH在7～7.6)的环境。酵母菌、霉菌和担子菌喜欢微酸性(pH值5～6.5)环境条件。黑木耳菌丝生长适宜的pH在6～6.8之间，在制备培养基时需测定并调整培养基pH至所需范围。

测定pH常用pH试纸或酸度计测定并加以矫正。市场上销售的pH试纸有广泛试纸和精密试纸两种。食用菌制种常用pH试纸为5.5～6.8的精密试纸。测定方法是取培养基液滴加到试纸上，或用镊子夹住小段试纸伸入培养基，使其发生化学反应，试纸颜色立即发生变化，然后取出小段试纸与标准比色板比较，找到与比色板上色带一致者，其数值即为该培养基的pH值。如果培养基pH值不在培养食用菌的生长要求，要进行调整。培养基过酸可用稀碱，即10%氢氧化钠液调整。如果培养基过碱，则用稀盐酸或乳酸液调整。调整时要细心，几滴几滴地加碱或酸，不可调得过碱或过酸，以免某些成分遭到破坏。

3.加入琼脂并分装

将称好的琼脂剪成小块，加入配好的液体培养基中，边加热边搅拌，防止培养基沉到锅底烧焦或溢出，烧糊的培养基营养物质遭到破坏，而且易产生对黑木耳菌丝生长有害的物质，不宜再用。加热过程损失的水分应补足。待琼脂完全溶化后，用湿纱布(纱布经热水浸后拧干)迅速过滤，以提高培养基的透明度，过滤后趁热分装。

分装前准备好容器，制作母种常用试管规格有18毫米×180毫米、20毫米×200毫米或25毫米×200毫米等。所用试管先清洗、干燥。新购买的试管因管内残留烧碱，最好先用稀硫酸液在不锈钢锅中煮沸，再冲洗干净，倒置晾干后备用。切勿现洗现用，以免因试管附有水膜，导致培养基在试管内滑动。

分装试管时尽量避免培养基粘附试管口，如果不慎培养基粘试管口用纱布擦净，以免培养基粘住棉塞影响接种，增加杂菌污染机率(见图4－4)。试管装量根据需要而定，制作斜面培养基装量为试管高度的1/5～1/4;制作深层培养基装量为试管高度的1/2～2/3。装入三角瓶培养基的量不超过瓶容量的1/3。分装时用漏斗置漏斗架上进行。

图4－4　分装试管培养基

4.塞棉塞

棉塞能过滤空气，防止杂菌侵入，减缓培养基水分蒸发。试管培养基分装好后及时加盖棉塞。棉塞用普通棉花制作，不使用脱脂棉，因脱脂棉极易吸水变潮，污染杂菌。棉塞大小、松紧与试管口或三角瓶口径一致，塞入试管的棉塞要紧贴管壁、不留缝隙。过紧妨碍空气流通，不便操作;过松达不到过滤杂菌的目的，且棉塞易掉入试管内或脱离试管口。松紧度以提起棉塞后试管跟着提起而不脱落，拔出棉塞可听到轻微声音为度。标准棉塞塞头略大，不易变形，塞入试管部分占棉塞总长的2/3，露在试管外部为1/3(且不少于1厘米)。