培养基制备和灭菌

实训五　MS培养基制备和灭菌

一、目的、要求

通过MS培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。学习高压灭菌锅的使用，掌握培养基和培养用具的灭菌方法。

二、材料与用具

配制MS培养基的各种母液、生长调节物质母液、琼脂、蔗糖、蒸馏水、量筒、容量瓶、电炉、酸度计、0.1mol/L的NaOH、0.1mol/L的HCl、培养瓶、标签、铅笔、高压灭菌锅等。

三、方法步骤

（一）培养基的制备

1.按母液顺序和规定量，用吸管提取母液，放入盛有一定量蒸馏水的定容瓶定容到1000ml

母液　　　　1100ml　　　　母液210ml

母液　　　　310ml　　　　 母液410ml

取1/3左右倒入锅中在电磁炉上加热。

2.称取蔗糖、琼脂，融化琼脂

同时，称好蔗糖30g、琼脂6g倒入锅中，边加热边搅拌，防止糊底。然后再倒入定容瓶余下的培养基，旺火煮开，直至琼脂完全融化，即清澈见底为度。

3.加入生长调节物质

加入具体调节物质与量，视培养物不同而异，有时也可不加。

4.调整pH

经酸度计测试，用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl把培养基的pH调整到5.8～6.0。

5.培养基分装

把配制好的培养基分装到培养瓶中，100～150ml的培养瓶每瓶装入20～35ml培养基，即1L培养基约装35瓶。太多则浪费培养基，减少生长空间，太少不易接种和影响生长。分装后立即加盖，贴标签，注明培养基的名称与配制时间等。

（二）培养基灭菌

1.高压灭菌锅中放足量的水

2.打开电源开关，增压前排尽高压锅内的空气

3.待压力升至0.1～0.2MPa，温度121℃时，维持20分钟左右

4.灭菌时间到后，关闭电源，待高压锅压力表指针恢复到0后，开启高压锅

5.将培养基和用具拿出冷却

6.高压锅在工作过程中应有人看守

制作程序如下：

四、实验报告

将本次实验内容整理成一份实验报告。

五、问题

1.植物组织培养基使用的支持物除了琼脂还有哪些？

2.高压灭菌锅的使用应注意哪些问题？