组织培养室

时间：2022-11-16 百科知识版权反馈

【摘要】：以工厂化大规模生产为目的，组培室规模太小，则会限制生产，影响效率。在设计组织培养室时，应按植物组织培养的程序来设计，避免某些环节颠倒，引起日后工作混乱，影响工作效率。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目及其他附属设备而定。氨基酸是蛋白质组成成分，也是有机氮源。2，4-D有利于愈伤组织生长，NAA、IAA、IBA有利于器官分化。

（一）组织培养室

以工厂化大规模生产为目的，组培室规模太小，则会限制生产，影响效率。在设计组织培养室时，应按植物组织培养的程序来设计，避免某些环节颠倒，引起日后工作混乱，影响工作效率。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。

1.组培室设计原则

保证无菌操作，达到工作方便，防止污染。

2.组培室组成

主要由准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室（接种室）、光照培养室、办公室、贮藏室等组成。

（1）准备室

完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装等。主要设备：药品柜、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计、加热器及常用的培养基配制需要的玻璃仪器等。

（2）洗涤灭菌室

完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。主要设备：洗剂槽、水池、操作台、玻璃器皿架、高压灭菌锅、干燥灭菌器（如烘箱）等。

（3）无菌操作室（接种室）

主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。无菌室的建造要求严格，接种室宜小不宜大，要求接种室干爽安静，清洁明亮，除出入口和通气口外，应当密闭，配置拉动门与缓冲间，以减少开关门时的空气扰动，在使用紫外光灯灭菌后，能较长时间保持无菌状态。为避免消毒药品的腐蚀，地板、内墙和作业台应采用耐水、耐药的材料，如经过油漆，铺上瓷砖或玻璃，或采用磨光水泥等，通气口要安装排风扇，定期开机更换空气。无菌室设内、外两间，外间小些，为缓冲室，供工作人员换衣、帽、鞋、口罩之用，备有衣帽钩和拖鞋架；内间较大，接种用，备有工作台等。内、外间分别安装紫外灯，操作前至少开灯20分钟。室内定期用甲醛和高锰酸钾熏蒸。主要设备有紫外光源、超净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针）等，如果进行大规模的工厂化生产，在门口最好安装风淋过滤系统，提高进出组培室人员的消毒效果。

（4）光照培养室

培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。培养室的大小可根据需要培养架的大小、数目及其他附属设备而定。其设计以充分利用空间和节省能源为原则。室内要求内壁保温并涂油漆，具有磨光水泥的或油漆过的地板，顶高以2.6米为宜，易于控制温湿度，窗户上要装双层密封玻璃窗。有窗户虽对保温保湿不利，但有自然光射入，对苗的生长和无菌有好处。室内要有足够的电源。室内要保持清洁，定期用20%新洁尔灭消毒，防止杂菌生长。

由于热带植物和寒带植物等不同种类要求不同温度，最好不同种类有不同的培养室。培养架可分5～6层，上面安装30～40瓦日光灯照明，每天照明10～16小时，用自动定时器控制。温度最好保持在15～25℃。室内湿度也要求恒定，相对湿度以保持在70%～80%为好，可安装加湿器。现代组培实验室大多设计为采用天然太阳光照作为主要能源，这样不但可以节省能源，而且组培苗接受太阳光生长良好，驯化易成活。在阴雨天可用日光灯作光源补充。主要设备有空调机，供升降温用；加热器，供加热用；温度控制器，供恒温用；定时器，供控制光照时间用；培养架，供放置培养瓶用，培养架的框子用三角铁制较好，应漆成白色或银灰色，每层隔板可用玻璃制成；日光灯供光照之用；小推车等。

3.植物组织培养常用药品

植物组织培养所需药品主要用于培养基的配制，也有部分用于消毒，主要有以下几类：

（1）消毒药品

主要有次氯酸钠、次氯酸钙、双氧水、漂白精片、溴水、硝酸银等。

（2）无机盐类

包括大量元素和微量元素两类，主要的盐类有KNO₃、MgSO₄·7H₂O、NH₄NO₃、KH₂PO₄、CaCl₂·2H₂O、Fe₂（SO₄）₃、Na₂HPO₄、CuSO₄、NaNO₃、Na₂SO₄、ZnSO₄、MnSO₄·4H₂O、MnCl₂·2H₂O、KI、H₃BO₃等，无机盐是供外植体吸收的基本营养成分，各有不同作用，如N、P影响蛋白质的合成，Ca、K、S、Mg影响酶的活性等。