染色体核型分析报告解读

1．检验目的

人类染色体核型分析主要是研究人类染色体的形态结构、染色体畸变，为染色体病诊断、鉴别诊断及治疗提供依据。

2．检测原理

人类染色体核型分析检测方法是培养法。

外周血淋巴细胞经细胞培养液培养在PHA刺激下经秋水仙碱终止、KCl低渗、胰酶消化、姬姆萨染色后，通过配对分析，观察人类染色体核型。

本系统使用显微镜及北京诺谱生物公司提供的试剂进行核型分析。

3．仪器操作性能参数

染色体核型分析虽然使用显微镜采集图像，但多为手工操作，故目前无操作性能指标。

4．标本

4.1 采集患者静脉血标本3 ml，置于肝素锂抗凝剂的真空试管内，混匀。

4.2 标本采集后应立即送到临床检验科细胞遗传室。

5．设备和试剂

5.1 显微镜。

5.2 1640细胞培养液：25%小牛血清100 ml，含青霉素和四环素各0.5%，1640培养基质10.4 g，植物细胞凝集素（PHA）0.4 g/L，pH 7.2。-20℃冻存。

5.3 低渗液（0.07 mol/L KCl溶液）：称取5.5 g KCl，加入1 000 ml蒸馏水中，室温保存。

5.4 固定液：甲醇与冰醋酸比例为3∶1，用时新鲜配制，室温保存。

5.5 终止液：12.5 mg/L秋水仙碱溶液，室温保存。

5.6 0.01 mol/L的磷酸盐缓冲液（PBS）：称取无水Na2HPO4 22.2 g和KH2PO4 0.35 g，加入1 000 ml蒸馏水中，室温保存。

5.7 姬姆萨染色液：称取0.75 g姬姆萨染料，加入100 ml甘油研磨，再加100 ml甲醇，混匀，室温保存。

5.8 0.02%胰蛋白酶应用液：称取胰蛋白酶粉（新疆伊犁生产）2.5克，溶解（冰浴）在0.9%NaCl液100 ml，配制2.5%原液。分装青霉素小瓶，-20℃冻存。临用时取原液0.5 ml加50 ml生理盐水，得0.02%胰蛋白酶应用液。

6．容器和添加剂类型

血液标本采集的容器是使用一次性肝素钠抗凝的真空采集试管；标本必需添加剂是肝素钠抗凝。

7．校准步骤

染色体核型分析不需要校准。

8．操作步骤

8.1 检验申请单及标本的检查、编号　整理血液染色体核型分析检验申请单及血液标本，审核合格（肝素钠抗凝的真空采集试管采集的静脉血3 ml）后，对标本标识内容与检验申请单相应内容复查，确认一致后编号。

编号原则：染色体核型分析采用六位编号法，第一、二位为年的代号；第三、四位为月的代号，最后两位为当月检验顺序编号，如2005年3月的第8个标本编号为050308。

编号完毕再对全部检验申请单、标本编号进行复查（标本标识的姓名与检验申请单一致；标本标识的编号与检验申请单一致），确认无误后对样品进行接种处理。

8.2 标本接种及培养

8.2.1 1640培养瓶从冰箱中取出，放入37℃±1℃水浴箱中解冻或放入培养箱使其成37℃±1℃备用。使用前先将培养瓶编号（编号原则与标本编号相同）。

8.2.2 用2.0 ml注射器无菌吸取标本约1.5 ml，将培基瓶盖在酒精灯上烧一下，将针头刺入瓶内加入约0.5 ml血液，每份标本接种二瓶培养，立即混匀（标本切勿多加，否则细胞生长不良）。

8.2.3 置37.5℃±1℃孵箱内培养72 h（其间注意观察和调整温度，务必使温度保持在37.5℃±1℃）。

8.2.4 染色体核型分析试验已接种培养后的血液标本，应放2～8℃冰箱保存5 d。

8.3 细胞终止

8.3.1 终止前45 min从培养箱中取出培养瓶，加入12.5 mg/L秋水仙碱40μl。

8.3.2 将培养瓶细胞悬液5 ml吸入试管中，离心（2 000 r/min，5 min）。

8.3.3 弃上清，将管底细胞团振摇打散，加入已预热的低渗液5 ml充分混匀，置37.5℃±1℃水浴箱中放置30 min左右，再加新鲜配制的固定液0.5 ml充分混匀，放置5 min后离心（2 000 r/min，5 min），弃上清。

8.3.4 固定。加入固定液5 ml充分混匀，放置20 min后，离心并弃上清。重复此过程二次。

8.3.5 弃上清，酌情加固定液0.1～0.3 ml，混匀成细胞悬液备用。

8.4 制片

8.4.1 将预先冷冻的载玻片置于水平位。

8.4.2 吸取充分混匀的细胞悬液，距20～30 cm高度向玻片中心滴加悬液3～4滴。

8.4.3 过火固定　将多余的水用滤纸吸掉。在酒精灯火焰上轻过两次，置片架上放入68℃±8℃烤箱烘烤2 h。

8.5 显带染色

8.5.1 在37℃±2℃水浴箱中预热两个50 ml生理盐水的染缸，在染缸中各加入5% NaHCO3和4%酚红溶液2滴，其中一缸中加入2.5%胰蛋白酶0.5 ml，充分混匀。

8.5.2 将烤过的玻片放入37℃±2℃水浴箱孵育的0.02%胰酶生理盐水中消化处理30 s。

8.5.3 在生理盐水缸中漂洗。

8.5.4 取出加上0.01 mol/L PBS配制的姬姆萨染液（比例为8∶1），盖满整个玻片，5～8 min后用自来水冲洗晾干。

8.6 镜下读片分析　采集分裂良好的分裂相进行核型分析，镜下分析30个中期分裂相并用计算机分析3～5个分裂相，排列好核型图保存并打印归档发出报告。

8.7 检验结果的输入

8.7.1 打开电脑，启动“检验程序”，输入用户名及口令后，进入检验程序。

8.7.2 单击“检验”菜单，选择“检验结果录入\修改”，进行检验结果的录入及修改。通过申请序号进行结果的输入（扫入），选择“工作单号”（染色体分析为R加序号），输入检测结果；同时输入当前患者的样品“采集时间”和“接收时间”；并逐个检查患者以前的检测结果进行历史回顾，观察变化趋势。

8.8 检验结果的确认　检验结果的确认应由主管技师（主治医师）或专业负责人进行确认，方法为单击“结果处理”菜单，选择“报告确认”进入结果确认，通过选择“工作单元”、“报告日期”、“单张”或“批量”后，按“提取”键提取检测结果，按检验结果记录核对，逐一按“确认”键进行确认。

9．质量控制措施

由于染色体核型分析目前还以手工操作为主，受操作者个人因素的影响和技术条件的限制，变异较大，不易标准化，因此这就要求检验人员受过专门培训，且技术过硬，有高度责任心，严格按照操作程序进行，确保实验的准确性和稳定性。

10．干扰因素

标本溶血、凝集均可使细胞分裂相减少或不分裂。

11．结果计算及测量不确定度

染色体核型分析不需要结果计算。

测量不确定度的来源包括样本、标本采集过程、送检时间、保存条件、药物、检测系统、员工素质等因素。

12．生物参考值区间

正常人细胞染色体核型为：男性：46，XY；女性：46，XX。

13．患者检验结果可报告区间

染色体核型分析患者染色体检验结果可报告区间：正常及各种异常核型。

14．警告/危急值

染色体核型检查无警告/危急值。

15．实验室解释

当结果发生异常时（数量或结构）（结构异常常见：异位、缺失、臂间倒位、臂间复制），均提示患者有发病的可能。15.1 适合于妇产科、内分泌科、泌尿外科、小儿科及血液科的疾病筛查诊治工作。15.2 对性别鉴定，染色体数目及染色体结构的改变所带来的临床生理变化，提供临床诊治依据。

16．安全防护措施

16.1 实验室及工作人员一般安全防护措施见《临床检验科安全手册》和《实验室安全管理程序》。

16.2 真空采血技术使血液标本在运输过程中是不会溢出的，如果出现血液污染容器或环境，则应立即用0.2%过氧乙酸溶液或75%酒精溶液进行消毒，防止污染的扩散和传播。

16.3 如果操作人员的皮肤或衣物上沾到了血液及废液，应立即用0.2%过氧乙酸溶液或75%酒精溶液消毒处理，再用肥皂水、清水进行冲洗。如果眼睛中溅入血液及废液，用大量的清水冲洗并采取必要的医疗措施。

16.4 对突发传染性疾病的血液标本的防护应启动特殊的安全防护程序。

17．变异的潜在来源

由于染色体核型分析目前还以手工操作为主，受操作者个人因素的影响和技术条件的限制，可能对染色体微小改变不能发现导致结果有误，但不至于危及生命，随检测技术的改进将予以弥补。

18．报告时间与标本保存

染色体核型分析6个工作日出结果。

19．参考文献

[1] 杜传书，刘祖洞．医学遗传学．2版．北京：人民卫生出版社，1992．

[2] 夏家辉，李麓云．世界首报中国人染色体异常核型图谱．郑州：河南科学技

术出版社，1993．