淋巴细胞转化试验

第二节　淋巴细胞转化试验

淋巴细胞转化试验是测定全血样品对结核菌素PPD抗原细胞的反应性。但是，这种方法需要从全血中分离淋巴细胞，需要在复合物组织培养介质中培养这些细胞3～5天，需要用放射核酸技术检测细胞增殖水平，因为试验耗时而且前期准备以及试验操作都比较复杂，如需要较长的孵育期和要使用放射性核苷酸等，所以，在常规的牛结核病诊断中并不被采用，而仅仅用于野生动物以及动物园动物的检测。下面简单介绍一下原理。

正常机体的T淋巴细胞在体外培养过程中，受到特异性抗原或有丝分裂原（植物血凝素或刀豆素等）的刺激，细胞的代谢和形态可发生一系列变化。主要表现为电荷的改变，细胞内蛋白质和核酸合成增加，以及细胞形态可转化为淋巴母细胞。为此，在体外利用各种刺激剂激发淋巴细胞，根据其转化程度可测定T淋巴细胞的应答功能。这类方法称为淋巴细胞转化试验，简称淋转试验，在临床上现已作为测定人体细胞免疫功能的指标之一。细胞免疫缺陷时，这种转化功能也降低。目前常用植物血凝素（PHA）作为分裂原来检测淋巴细胞转化功能，称PHA刺激淋巴细胞转化试验。

一、分类

体外引起T淋巴细胞转化的刺激物种类颇多，大致有以下几类。

1．非特异性抗原刺激物

如从豆类中提取的植物血凝素（PHA）和刀豆素A（ConA）等，通称为促有丝分裂素（mitogen）。

2．特异性抗原刺激物

如结核菌纯化蛋白衍生物（purifeg protein derivative简称PPD）等。

3．组织抗原和抗血清

如同种白细胞、抗淋巴细胞血清等。

上述各种刺激物中以PHA应用最广，在体外淋巴细胞培养中，可使正常人外周血液中T淋巴细胞几乎均起转化，其所引起的淋巴细胞转化率大大超过特异性抗原的作用。但这种反应与机体是否致敏无关，因此，是属于非特异性的淋转试验。特异性抗原仅能使相应抗原致敏的淋巴细胞发生转化，转化率一般在5%～30%，虽然，T淋巴细胞对非特异性和特异性抗原的识别过程不同，但被激活后，所发生的分裂和增殖反应却是相同的。因此，根据PHA激活T淋巴细胞分裂增殖反应的程度，可以推测T淋巴细胞识别特异性抗原后的增殖反应，从而利用PHA刺激淋巴细胞转化试验的一项非常特异性的体外免疫学检测指标，在一定程度上可作为刺激原，因此，一般称为PHA淋巴细胞转化试验。

PHA淋转试验有形态计数法和同位素计数法两种，前者测定转化的淋巴母细胞百分率，后者测定放射性同位素标记的DNA前身掺入细胞合成DNA的量。

形态计数法的优点是不需要特殊设备，便于一般实验室采用，但判读结果主观因素影响较大，而且有相当数量的中等大小的淋巴细胞难于分类。此外，在培养过程中单核细胞相对增大，形成似转化的淋巴细胞，容易造成误计。加上此法的测定效率低，重现性较差，有被同位素掺入法取代的趋向，但要了解被激活淋巴细胞的比例和形态改变，则仍需应用形态观察法。

二、操作方法

1．形态学方法

加分裂原共同培养后，观察形态学变化，计算转化为母细胞的百分数。

2．³H-胸腺嘧啶核苷掺入法（3H-TdR）

加分裂原共同培养结束前一定时间，加3H标记的胸腺嘧啶核苷，培养后测定摄入细胞内的放射性物质的相对数量，以间接了解转化程度。

形态学方法比较简单易行，不需特殊设备，但重复性和客观性较差；³H掺入法结果客观，准确性好，重复性好，但需要一定设备条件。