任务4.3高压蒸汽灭菌技术

任务4.3　高压蒸汽灭菌技术

4.3.1　实训目的

了解高压蒸汽灭菌的原理、使用范围和注意事项。熟悉高压灭菌器的构造，掌握高压蒸汽灭菌技术。

4.3.2　实训材料、仪器

1）实训材料

锥形瓶或试管装牛肉膏蛋白胨培养基。

2）仪器

手提式高压蒸汽灭菌器，立式高压蒸汽灭菌器，电热恒温培养箱。

4.3.3　实训步骤

1）高压蒸汽灭菌器的基本构造

高压蒸汽灭菌器有卧式（图4.1）、手提式（图4.2）及立式（图4.3）等不同类型。其基本构造大致相同。

图4.1　卧式高压蒸汽灭菌器

图4.2　手提式高压蒸汽灭菌器

图4.3　立式高压蒸汽灭菌器

（1）外锅

供装水发生蒸汽之用，有的灭菌器外锅装有水位玻管用以判断装水量。

（2）内锅

也称为灭菌室，是放置灭菌物品的空间。

（3）压力表

压力表一般有两种单位，压力单位（kg/cm²、kPa或MPa）以及温度单位（℃）。

（4）温度计

（5）排气阀

用于排除冷空气，保证灭菌压力。

（6）安全阀

利用可调节的弹簧控制活塞，超过额定压力时即可自行放气减压。

2）高压蒸汽灭菌器的使用步骤

高压锅的使用步骤一般分为装锅、加热排气、升压、保压和降压。

（1）加水

手提式灭菌器须先将内锅取出，向外锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平。立式灭菌器一般都有水位玻管，将水加至上、下水位线之间。

（2）装锅

放回内锅，将待灭菌的培养基或其他物品疏松摆放其内，盖上锅盖，对角线式拧紧锅盖上的螺旋。

（3）加热排气

用电源或其他热源加热。打开排气阀，待大量热蒸汽冒出约2min，完全排净冷空气后再将其关闭。

（4）升压

排气后关闭排气阀，使灭菌器内处于密闭状态。随着热蒸汽的不断增多，锅内蒸汽压也随之加大，温度逐渐上升，直至压力达到所需压力。升压要缓而稳，不能忽快忽慢甚至降压。

（5）保压

待压力升至所需的压力时，调节热源维持恒压直至所需灭菌时间。一般培养基需在103kPa（121℃）压力下，维持30min左右。不同物品应采用不同的压力和时间。

（6）降压

完成灭菌时间后关闭热源，压力徐徐下降，一定要待压力自然下降至“0”时才能打开排气阀和锅盖，取出灭菌物品。

（7）灭菌效果检查

将取出的灭菌培养基放入37℃恒温培养箱内培养24h，经检查若无杂菌生长，即可待用。

4.3.4　注意事项

（1）高压蒸汽灭菌器使用前必须检查水量，以防灭菌锅干烧而引发安全事故。

（2）灭菌过程中，必须完全排尽锅内冷空气，否则会影响灭菌效果。

（3）灭菌结束后，压力一定要降到“0”时，才能打开排气阀，开盖取物。否则就会因锅内压力突然下降，使容器内培养基冲出分装容器，造成棉塞沾染培养基而发生污染，或烫伤操作者。

4.3.5　实训结论

（1）检查培养基高压蒸汽灭菌是否彻底。

（2）高压蒸汽灭菌时，为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌结束后，为什么要等压力降至“0”时才能打开排气阀，开盖取物？

（3）使用高压蒸汽灭菌器时，怎样杜绝一切可能导致灭菌不完全的因素？