任务4.2干热灭菌技术

时间：2022-10-15 百科知识版权反馈

【摘要】：如果是对人有致病性的培养物，需经过蒸煮灭菌后再行洗涤。如仍留有油污，则需浸入洗液内，经1h后取出洗涤。新载玻片和盖玻片需先在2%盐酸溶液中浸1h，然后用自来水冲洗，再用蒸馏水换洗两次；也可用1%洗衣粉液洗涤。用洗衣粉液洗涤新载玻片时，先将洗衣粉液煮沸，然后将载玻片散开放入煮沸液中，持续煮沸15～20min。用洗衣粉水洗涤新盖玻片时，将盖玻片散开放入煮沸的洗衣粉液后，保持1min；待泡沫平下后再煮沸1min，如此重复2～3次。

任务4.2　干热灭菌技术

4.2.1　实训目的

了解干热灭菌的原理及应用范围；掌握常用玻璃器皿的包扎方法及干热灭菌的操作技术。

4.2.2　实训材料、仪器

1）材料

培养皿5或10套，吸管5支，涂布棒2支，报纸若干，棉花少许。

2）仪器

电热干燥箱，温度计。

4.2.3　实训步骤

1）玻璃器皿的洗涤

（1）新玻璃器皿的洗涤

新购的玻璃器皿含有游离碱，应用2%的盐酸溶液浸泡后，再用水冲洗干净。

（2）用过的玻璃器皿的洗涤

盛过液体培养物质或琼脂培养基的玻璃器皿，应先将培养物倒入或刮入废物缸中，另行处理。如果是对人有致病性的培养物，需经过蒸煮灭菌后再行洗涤。

洗涤时使用试管刷，以清水冲洗。如有油脂，可沾肥皂或洗衣粉擦洗后，再以清水冲洗。

（3）吸管的洗涤

吸取过一般液体的吸管，用后浸入盛有清水的高玻璃容器内，勿使管内干燥以减少洗涤的麻烦。吸过菌液的吸管，应先浸入5%的石炭酸溶液内，经5min以上灭菌后，再浸入清水中。吸过含油液体的吸管，应先浸入10%氢氧化钠溶液中经1h以上，再行清洗。如仍留有油污，则需浸入洗液内，经1h后取出洗涤。

吸管上端管内若塞有棉花时，洗涤前先用针将棉花取出再进行洗涤。

（4）载玻片和盖玻片的洗涤

新载玻片和盖玻片需先在2%盐酸溶液中浸1h，然后用自来水冲洗，再用蒸馏水换洗两次；也可用1%洗衣粉液洗涤。用洗衣粉液洗涤新载玻片时，先将洗衣粉液煮沸，然后将载玻片散开放入煮沸液中，持续煮沸15～20min（注意勿使玻片露出液面，以防钙化变质）。冷却后用自来水冲洗，再以蒸馏水换洗2次。用洗衣粉水洗涤新盖玻片时，将盖玻片散开放入煮沸的洗衣粉液后，保持1min；待泡沫平下后再煮沸1min，如此重复2～3次（煮沸时间过长，会使玻片钙化变白易碎）。冷却后用水冲洗，再以蒸馏水换洗。

用过的载玻片和盖玻片，应先用纸擦去油污。放在5%肥皂水（或1%的苏打水）中。煮沸约10min后，立即用自来水冲洗；然后放入洗涤液（稀配方）中浸泡2h，再用清水及蒸馏水换洗。

2）玻璃器皿的包扎

培养皿一般根据需要5或10套为一包，用双层报纸包。

吸管在包扎前，应在管口塞入长约1cm的棉花。然后将吸管尖端放在4～5cm宽的长纸条的一端，使其与纸条呈45°角卷叠纸条，直至将吸管全部包卷，末端多余的纸条打结，最后再将吸管集中包扎成捆。

涂布棒（玻璃刮铲）的包扎同吸管一样，也要逐个用报纸包裹。

3）干热灭菌

（1）装入灭菌物品

将包扎好的待灭菌物品（培养皿、吸管等）放入电热干燥箱内，关好箱门。

（2）温度设置

接通电源，按下设置按钮或开关，通过调节按钮将温度设置为160～170℃，再将测量按钮按下或将开关拨到测量位置，这时温度显示数字逐渐上升（若没有数显，则需用温度计测量），表明开始加热。

（3）恒温

当温度上升到160～170℃时，借助恒温调节器的自动控制，保持温度2h。