首页 百科知识 标记探针纯化方法

标记探针纯化方法

时间:2022-07-03 百科知识 版权反馈
【摘要】:1.凝胶过滤柱层析法 利用凝胶的分子筛作用,将大分子DNA与小分子dNTP、磷酸根离子及寡核苷酸等分离。2.乙醇沉淀法 DNA可被乙醇沉淀,而未掺入的dNTP则保留于上清中,如此反复乙醇沉淀,可将二者分离。3.纯化试剂盒 现在也有商品化的纯化试剂盒供应。用此法纯化标记探针所需时间短,得率较高。但是,对于长度短于100bp的寡核苷酸探针,由于其不能与玻璃纤维结合,故不宜用此法纯化。

探针标记好后,要经过纯化过程,去除无机盐、dNTP、酶等,常用纯化方法如下。

1.凝胶过滤柱层析法 利用凝胶的分子筛作用,将大分子DNA与小分子dNTP、磷酸根离子及寡核苷酸(<80bp)等分离。大分子DNA流出,而小分子则滞留于凝胶层析柱中,常用Sephadex G-50。

2.乙醇沉淀法 DNA可被乙醇沉淀,而未掺入的dNTP则保留于上清中,如此反复乙醇沉淀,可将二者分离。若用2mol/L乙酸铵和乙醇沉淀效果更好,连续沉淀2次,可去除99%的dNTP。蛋白质在此条件下不会被沉淀。需要注意的是沉淀必须彻底干燥,否则会明显增加杂交的背景着色。

3.纯化试剂盒 现在也有商品化的纯化试剂盒供应。其原理是在塑料管内用玻璃纤维做成一个固体滤过柱,当反应液通过此柱时,核酸成分与其结合,用清洗缓冲液将其他成分洗去后,再用洗脱缓冲液洗脱所要的探针核酸。用此法纯化标记探针所需时间短,得率较高。但是,对于长度短于100bp的寡核苷酸探针,由于其不能与玻璃纤维结合,故不宜用此法纯化。

免责声明:以上内容源自网络,版权归原作者所有,如有侵犯您的原创版权请告知,我们将尽快删除相关内容。

我要反馈