【摘要】：核酸杂交技术的基本原理 是，用酶、化学荧光物、放射性核素或生物素标记的已知序列的特定单链核酸作为探针，在一定条件下，按碱基互补原则探针与待测标本的核酸杂交，通过对杂交信号的检测，从而达到鉴定标本中有无病原微生物基因及其分子大小的目的。由于采用的手段不同，核酸杂交技术可分为液相杂交和固相杂交。在临床微生物检验中以后者常用。杂交后除去多余的探针，进行杂交信号的检测即可检查特定的DNA或RNA分子。
二、核酸杂交技术
核酸杂交技术的基本原理 是，用酶、化学荧光物、放射性核素或生物素标记的已知序列的特定单链核酸作为探针，在一定条件下，按碱基互补原则探针与待测标本的核酸杂交，通过对杂交信号的检测，从而达到鉴定标本(如血清、尿、粪便或活检组织等)中有无病原微生物基因及其分子大小的目的。
由于采用的手段不同，核酸杂交技术可分为液相杂交和固相杂交。在临床微生物检验中以后者常用。常用固相杂交技术主要有:①原位杂交:是以特定标记的已知序列核酸为探针，与细胞、组织和菌落中的核酸杂交，通过放射自显影、酶底物显色来检测特定的核酸分子。②斑点杂交:斑点杂交是将待测标本核酸提取物直接点加在膜上，用碱溶液处理使核酸变性并结合在膜上，加入探针进行杂交。杂交后除去多余的探针，进行杂交信号的检测即可检查特定的DNA或RNA分子。③Southern印迹杂交:Southern印迹杂交是电泳技术与杂交技术结合的一种方法 ，是用来检测经限制性内切酶酶切后的待检标本DNA片段中是否存在与探针同源序列。先将DNA标本经限制性内切酶作用消化成一系列片段，然后将DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳分离，用碱处理凝胶使之变性，经转移并固定于尼龙膜或硝酸纤维素膜上，以放射性核素标记的DNA探针进行杂交，通过放射自显影鉴定待测标本DNA片段。④Northern印迹杂交:Northern印迹杂交即RNA分子杂交技术。它分离标本中的RNA，经变性后用琼脂糖凝胶电泳分离，使用的探针是标记的cDNA。此法主要用于检测RNA病毒和研究病毒基因表达。
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