蜡样芽胞杆菌

十一、蜡样芽胞杆菌

蜡样芽胞杆菌（bacillus cereus）为革兰阳性、需氧芽孢杆菌，导致食源性疾病的菌株可以产生卵磷脂酶、蛋白酶、β-内酰胺酶、神经鞘髓磷脂酶、蜡样杆菌溶血素和溶血素BL。由该菌导致的食源性疾病可出现两个类型的症状：腹泻综合征与呕吐综合征。多发生在夏秋季（6～10月）最高。往往是食品在食用前保存温度不当，放置时间过长，给污染食品中的蜡样芽胞杆菌或残存的芽胞以生长繁殖的条件，因而导致发生食源性疾病。

1．常规分离鉴定技术

（1）检验样品处理、计数培养、直接分离培养和增菌培养：按GB／4789．14-2003的方法进行。

（2）肠毒素测定：可采用兔肠结扎试验、血管通透性反应、毒素致死试验、免疫反应检查等方法测定。方法可参见何晓青主编的《卫生防疫细菌检验》（1989年出版）。

（3）呕吐毒素定性测定：将含有0．95％氯化钠的米饭，经115℃灭菌15分钟，然后接种待测菌株置30±1℃培养18～20小时取出，将其用淀粉酶水解，经聚乙二醇透析浓缩后，用导管插入猴或猫的胃内，如含有呕吐毒素即发生呕吐。

2．流行病学调查分型技术

（1）生化学分型：日本的村上等曾将蜡样芽胞杆菌按5项生化指标分成15个生物型，后来日本的小佐等又分别用一些生化试验将该菌分成12个生物型和8个生物型。我国吴光先教授1984年报道使用5个生化试验将该菌分成32个生物型。

（2）血清学分型：利用蜡样芽胞杆菌H抗原进行分型，已有23个型的诊断血清，引起腹泻综合征菌株的血清型为2，6，8，9，10和12。引起呕吐综合症菌株的血清型为1，3，4和5型。方法可采用标记的SPA菌体试剂作玻片协同凝集试验，确定其血清型。作玻片协同凝集试验蜡样芽胞杆菌抗原制备：取蜡样芽胞杆菌的菌落接种在经湿润的琼脂斜面上，置36±1℃培养14～18小时取出，用直径3mm的接种环从斜面底部取一环液体培养物于2ml肉汤管中，置36±1℃培养5～6小时，即为玻片凝集试验用的抗原。

（3）分子生物学分型技术：台湾（1997年）报道用脉冲场凝胶电泳分析的蜡样芽胞杆菌的在小儿科里的一次感染事件。用不同的限制性核酸内切酶试验，发现SmaI酶给出了PFGE最好的分型结果。在26个临床分离的蜡样芽胞杆菌中，15个不同的PFGE分型模式是显著的；SmaI-PFGE能清楚地区别流行病学相关的流行株和不相关株之间的差异；同样的流行株从暴露在通风系统的出口中放置的平皿中分离出来，而这一事件的来源被怀疑在科室的空气过滤系统中，在流行病学调查中这种方法是有用的。英国（2000年）用扩增片断长度多态性（AFLP）方法来研究蜡样芽胞杆菌的流行型。采用7次食物中毒和8次非食物中毒事件中分离的21株菌。AFLP分型结果用来和传统的鞭毛抗原血清学分型进行比较，评估和流行病学数据的关联度。AFLP分型有高度的重复性并分出16个分型模式，每次事件都有唯一的AFLP分型模式。英国的呕吐型蜡样芽胞杆菌食物中毒的主要血清型H1可由AFLP进一步分为3个亚型。