嗜热脂肪杆菌芽孢

嗜热脂肪杆菌（bacillus stearothermophilus，ATCC　7953＆SSKI　31）属于嗜热菌属、芽孢菌种，作为热力灭菌因子杀菌试验指标菌则为ATCC　7953＆SSKI　31两个菌株。

【生物特征】

1.形态特征　在普通光学显微镜下可见为细长杆菌、革兰染色阳性，多数散在排列、部分呈短链状排列，比较容易辨认。嗜热脂肪杆菌在固体培养液上培养48h以上即可逐渐形成芽孢，芽孢体位于菌体次端呈卵圆形内生芽孢。

2.培养特征　属于需氧细菌，在普通营养培养液上生长良好，但生长速度相对较缓慢。在营养肉汤内于适宜温度下培养17h即可生长出肉眼可见的现象，24h在肉汤表层出现明显的菌膜或块状沉淀，轻轻振摇肉汤即浑浊。在营养琼脂培养液上培养24h，可形成暗灰色、光滑、平坦边缘不整齐的菌落，随培养时间延长，固体培养液上细菌逐渐形成芽孢，培养3～5d细菌芽孢形成率逐渐达到90%以上。该菌最适宜生长温度为56～65℃，该菌在35℃以下基本不生长即便在37℃条件下也形不成肉眼可见的生长特征。

3.生化特征　经过常规定性生化检验可见，过氧化氢酶试验呈迟缓性弱阳性反应，不能利用枸橼酸盐、丙酸盐和马尿酸盐，可还原枸橼酸盐，不液化明胶，V-P试验阳性；ATCC　7953标准株对卵黄和淀粉水解试验均呈阴性反应，此为该菌株独特反应。

4.抗力特征

（1）基本要求：嗜热脂肪杆菌芽孢作为压力蒸汽消毒效果监测标准菌株对其抗力有特殊规定。国际国内标准规定指标一致即使用特殊制备的细菌芽孢悬液，污染在特殊定性滤纸制成染菌载体。

（2）染菌量：每个载体含菌量要求达到5 ×105～5×106cfu／片，干燥菌片。

（3）抗力参数：在121℃饱和压力蒸汽条件下，存活时间（ST）≥3.9min，杀灭时间（KT）≤19min，D值1.3～1.9min。

【指示剂】

1.菌片　将5×105～5×106cfu／片定量污染在特定中型滤纸上，干燥后装入无菌透气性纸袋内，加外包装即可。经压力蒸汽灭菌抗力测定，必须符合规定标准。

2.自含式生物指示剂管　在一个透明耐热的塑料管内，装入1片菌片至管底部；将1支装有溴甲酚紫蛋白胨水恢复培养液的玻璃瓶装入塑料管内，加盖并在盖上留有透气孔，盖内加有滤膜，可防止微生物投入。经压力蒸汽灭菌抗力测定，必须符合规定标准。

【用途】

如上所述两个标准菌株均为国际标准菌株，我国国家卫生部最新颁发的《消毒技术规范》和国家标准GB15981－1995《消毒与消毒效果的评价方法和标准》均采用嗜热脂肪杆菌（ATCC　7953＆SSKI　31）芽孢作为我国标准试验菌株。所有湿热灭菌主要是压力蒸汽（下排气式压力蒸汽灭菌器和预真空式或脉动真空式压力蒸汽灭菌器）灭菌效果均采用上述两株芽孢进行考核和监测；经国家批准的ME－型生物指示剂既采用ATCC　7953株芽孢制备而成，为国内惟一经过系统抗力测定和培养条件研究，具有完整的研究资料，最先获得国家注册的压力蒸汽灭菌效果试验指标菌商品。

嗜热脂肪杆菌芽孢商品剂型可用于各种压力蒸汽消毒设备消毒效果监测，同时可用于低温等离子体消毒设备和低温蒸汽甲醛消毒设备的消毒效果监测，也可用于微波消毒效果监测。

【注意事项】

1.加强恢复培养液的营养　嗜热脂肪杆菌芽孢经过热损伤之后，需要特殊恢复培养条件即用专门恢复培养液进行复苏培养。试验证明，在恢复培养液内如葡萄糖蛋白胨水中加入适量可溶性淀粉有利于热损伤细菌的恢复。

2.培养芽孢需用专门培养液　制备芽孢的培养液成分可影响其抗力，特别是钙或锰离子的存在可提高芽孢的热抗力，而镁离子则可使芽孢热抗力下降。

3.培养温度和合适　培养温度对芽孢热抗力亦有一定影响，嗜热脂肪杆菌芽孢培养温度为50～85℃，但随温度增高、培养出的芽孢热抗力增强，所以标准抗力的芽孢最佳培养温度为55～65℃。

4.制备芽孢必须规范　制备的芽孢悬液内不得含有繁殖体，制备芽孢悬液清除其中的繁殖体非常关键。目前，灭活芽孢液中的繁殖体可采用热力灭活法即水浴内85℃10min或100℃5min；另一种方法为酶处理法即用溶菌酶消化法。