肠杆菌科其他细菌的培养及鉴定

实验四　肠杆菌科其他细菌的培养及鉴定

一、目的要求

1．熟悉肠杆菌科其他细菌如克雷伯菌属、肠杆菌属、变形杆菌属、摩根菌属的生物性状和生化反应特点。

2．掌握变形杆菌迁徙现象及变异原理。

3．掌握氨基酸脱羧酶实验、苯丙氨酸脱氨酶实验的原理及方法。

二、实验原理

肠杆菌科细菌的科内鉴别：根据苯丙氨酸脱氨酶和VP试验，分为3大类：

苯丙氨酸脱氨酶阴性和VP试验（或葡萄糖酸盐试验）阴性的菌属包括：艾希菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸菌属、爱德华菌属和耶尔森菌属。

苯丙氨酸脱氨酶阴性和VP试验（或葡萄糖酸盐试验）阳性的菌属包括：克雷伯菌属、肠杆菌属（有例外）、哈夫尼亚菌属、沙雷菌属。

苯丙氨酸脱氨酶阳性和VP试验（或葡萄糖酸盐试验）阴性的菌属包括：变形杆菌属、摩根菌属、普罗威登斯菌属。

三、实验内容及方法

（一）肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、摩根菌的形态

1．菌落形态观察。

（1）材料。

菌种：肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、摩根菌。

培养基：Mac、SS平板。

（2）实验方法。

将4种菌分别接种在Mac、SS平板上，37℃培养箱中培养18～24h，观察生长情况。

（3）结果记录及分析如表2－4所示。

准确描述各菌菌落形态，并加以比较。

表2－4　肠杆菌科其他细菌的选择培养结果

2．变形杆菌迁徙现象。

（1）材料。

菌种：普通变形杆菌。

培养基：营养琼脂平板、石炭酸平板。

（2）实验方法。

接种针挑取少量普通变形杆菌，分别在营养琼脂平板、石炭酸平板中央进行点种，37℃培养箱中培养18～24h，观察生长情况。

（3）结果记录及分析。

变形杆菌在普通琼脂平板上可见迁徙现象，表现为波纹状薄膜，布满整个培养基表面；在石炭酸平板上没有此现象，因石炭酸会抑制鞭毛蛋白的合成。

（二）肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、摩根菌的生化反应

1．苯丙氨酸脱氨酶实验。

某些细菌可在产生苯丙氨酸脱氨酶，使苯丙氨酸脱去氨基，形成苯丙酮酸，加入FeCl₃后产生绿色反应。

（1）材料。

菌种：肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、摩根菌。

培养基：苯丙氨酸培养基。

（2）方法。

将4种菌分别接种至苯丙氨酸培养基，37℃培养箱中培养18～24h，滴加10% FeCl₃溶液1～2滴。

（3）结果记录及分析。

观察结果前沿着管壁缓慢加入2～3滴FeCl₃溶液，立即出现绿色者为阳性。（应立即观察结果，延长反应时间会引起褪色。）

记录各菌的试验结果。

2．氨基酸脱羧酶实验。

（1）材料。

菌种：肺炎克雷伯菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、摩根菌。

培养基：氨基酸培养基、对照培养基。

（2）方法。

将4种菌分别接种于鸟氨酸培养基和对照培养基中，并加入无菌液体石蜡，37℃培养箱中培养18～24h观察结果。

（3）结果记录及分析。

观察测定管和对照管的颜色变化，根据下表判断氨基酸脱羧酶的试验结果如表2－5所示。

表2－5　氨基酸脱羧酶的结果判断标准

四、思考与讨论

1．克雷伯菌属、肠杆菌属、变形杆菌属、摩根菌属细菌的鉴别要点分别是什么？

2．乳糖发酵试验阳性的有哪些菌？

3．怎样区分产气肠杆菌与大肠埃希菌？