化妆品中粪大肠菌群的检测

粪大肠菌群是生长于人体和温血动物肠道中的一组肠道细菌，随粪便排出体外，约占粪便干重的1/3以上，故称为粪大肠菌群。受粪便污染的水、食品、化妆品和土壤等物质均含有大量的这类菌群。在化妆品中若检出有粪大肠菌群，即表明该化妆品已被粪便污染，这时一般该化妆品的菌落总数均很高。被粪便污染的化妆品中可能有肠道致病菌存在，经消费者使用等途径进入人体后，可引起肠道性疾病，故这种化妆品对消费者存在潜在的危险性。从对化妆品微生物污染状况检测表明，有三种微生物（粪大肠菌群、铜绿假单胞菌和金黄色葡萄球菌）容易引起化妆品的污染，其中以粪大肠菌群超标比例最高。

（一）粪大肠菌群的生化特性

粪大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据卫生学方面的需要，设定的一类与粪便污染有关的一组细菌。粪大肠菌群为一群需氧及兼性厌氧的菌群，呈革兰阴性反应，能在普通培养基上生长繁殖。其生化活动能力较强，能发酵多种糖类，产酸产气，其特点是能较快发酵乳糖。

粪大肠菌群在乳糖培养基中于37℃下进行培养，在24h内能使乳糖发酵产酸，还有甲酸解氢酶进行甲酸分解，生成氢气和二氧化碳，产生大量气体，这时，若加入伊红美蓝指示剂，分解乳糖所产生的酸（带阳电荷）与伊红相染呈紫色且有金属光泽，故常用此特性来鉴定识别粪大肠菌群。将粪大肠菌群接种于蛋白胨水培养基中，于37℃培养24h，粪大肠菌群能分解培养基中蛋白质的色氨酸，产生靛基质（吲哚），当与试剂（对二甲基氨基苯甲醛）作用后，形成红色化合物——玫瑰靛基质（玫瑰吲哚），此种反应在生化中称为吲哚反应。

（二）检测步骤

（1）发酵（产酸产气）试验 将试样液以无菌接种于双倍乳糖胆盐发酵管（其内放有倒置的小玻璃管，以收集气体）内，置44℃培养箱中培养24~48h。由于乳糖胆盐培养基是一种具有选择作用的培养基，其中胆盐具有抑制革兰阳性菌的作用。若观察到发酵管内不产酸（由酚红指示剂指示）、不产气，则报告试样为粪大肠菌群阴性，未检出粪大肠菌群，检测结束。若发酵管内产酸产气，则继续进行下列检测。

（2）鉴别培养 将产酸产气的发酵管内试样培养液接种到伊红美蓝琼脂培养基平皿上，置37℃培养18~24h；同时将该培养液接种到蛋白胨水中，置44℃培养24h。

（3）验证试验 对所检出的细菌需进一步验证其是否是粪大肠菌，验证方法有以下三种：

①菌落观察：在上述平皿培养基上，仔细观察菌落生长情况。大肠菌群在伊红美蓝琼脂培养基上其典型菌落呈深紫色、圆形、边缘整齐、表面光滑湿润、常有金属光泽，或呈紫黑色不带或略带金属光泽及粉色，中心较深的菌落。

②革兰染色、镜检：将以上典型的（或近似的）大肠菌群菌落进行革兰染色、镜检，若革兰染色呈阳性（紫色）反应，则报告粪大肠菌群呈阴性，未检出粪大肠菌群。若革兰染色阴性，检测还需进行下一试验以待进一步证实。

③靛基质试验（吲哚试验）：在上述已培养好的蛋白胨水中滴入靛基质试剂（对二甲基氨基苯甲醛试剂）进行靛基质反应，若液面呈玫瑰红色，呈阳性反应，则报告粪大肠菌群呈阳性，检出；若液面仍是棕黄色，则报告粪大肠菌群呈阴性，未检出粪大肠菌群。

综合分析以上所有测试结果，当发酵管内产酸产气，观察试液平皿上为典型粪大肠菌群菌落，并经革兰染色、镜检试验为阴性（-）及靛基质试验为阳性（+），则报告该试样液检出粪大肠菌群。