铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）为革兰阴性杆菌，属假单胞菌属。它在自然界分布甚广，空气、水、土壤中均有存在，在潮湿处可长期生存，对外环境的抵抗力比其他菌强，抗干燥的能力也强。含水分较多的原料、化妆品易受铜绿假单胞菌的污染。铜绿假单胞菌对人类有致病力，常引起人体的眼、皮肤等处感染，特别是烧伤、烫伤及外伤患者感染上铜绿假单胞菌常使病情恶化，严重时可引起败血病，眼睛受伤感染后可使角膜溃疡并穿孔，严重可致失明。目前，该菌已是防止医院感染和药品、化妆品及水等必须严加控制的重要病原菌之一，我国化妆品卫生标准规定在化妆品中不得检出铜绿假单胞菌。
（一）铜绿假单胞菌的生化特性
铜绿假单胞菌是革兰阴性杆菌，有鞭毛，能在普通培养基上生长繁殖，为需氧及兼性厌氧类细菌。铜绿假单胞菌能代谢产生一种绿色的水溶性色素，使培养基变成绿色，引起化脓感染，脓液就常带绿色，因此又称为绿脓杆菌。
铜绿假单胞菌可分解葡萄糖；对明胶具有液化、溶解作用；能还原硝酸盐成为亚硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氢气；铜绿假单胞菌具有氧化酶（靛基氧化酶），能将试剂（盐酸二甲基对苯二胺或四甲基对苯二胺）氧化成红色的醌类化合物；还可在42℃的温度下生长繁殖。铜绿假单胞菌的这些生化特性常用来作为分离和鉴别它的方法。
（二）检测步骤
（1）增菌培养 将试样液稀释，无菌操作加入SCDLP液体培养基中，置37℃培养24h，进行增菌培养。如有铜绿假单胞菌生长，培养基表面有一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色荧光。
（2）分离培养 从以上增菌培养液上的薄菌膜挑取培养物，划线接种于选择培养基——十六烷基三甲基溴化胺琼脂培养基（或乙酰胺琼脂培养基）平皿上，在37℃进行24h分离培养。该类培养基选择性强，大肠杆菌不能生长，革兰阳性菌生长完全受到抑制。观察培养基上所形成的菌落，典型铜绿假单胞菌菌落特征是菌落扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，表面湿润，菌落呈灰白色，菌落周围培养基常扩张有水溶性色素。
（3）验证试验 对所检出的细菌需进一步验证其是否是铜绿假单胞菌，验证方法有以下六种：
①染色镜检：取上述可疑为铜绿假单胞菌的菌落，进行革兰染色、镜检试验。
②氧化酶试验：挑取可疑菌落（同上）置于滤纸片上，滴加一滴新配制的5%二甲基对苯二胺试剂，15~30min内，出现红色至紫红色时，为氧化酶试验呈阳性；若不变色，为氧化酶试验呈阴性。
③绿脓菌素试验：取可疑菌落2~3个，置于绿脓菌素测定用培养基上，于37℃培养24h，加入氯仿、色素溶于其内后，加入盐酸，上层稀盐酸液内出现红色时为阳性，表示菌落中含有绿脓菌素。
④明胶液化试验：将可疑菌落的纯培养物，穿刺接种于明胶培养基内，置37℃培养24h，取出放入冰箱l0~30min，如有溶解，即明胶液化试验呈阳性；如凝固不溶，则明胶液化试验呈阴性。
⑤硝酸盐还原试验：挑出被检纯培养物，接种于硝酸盐胨水培养基中，置37℃培养24h，在培养基中的小倒管内有气体者，试验呈阳性，表明该菌能还原硝酸盐并将亚硝酸盐分解产生氢气。
⑥42℃生长试验：挑取纯被检物，接种于普通琼脂斜面培养基上，于42℃培养48h，铜绿假单胞菌能生长为阳性反应。
综合分析以上所有测试结果，被检试样液经增菌、分离培养后，观察菌落，对疑似铜绿假单胞菌菌落，证实为革兰阴性杆菌，且氧化酶试验、绿脓菌素试验都呈阳性，则报告试样检出铜绿假单胞菌；若其中绿脓菌素试验为阴性，但明胶液化试验、硝酸盐还原试验及42℃生长试验都为阳性，这时也报告测试物被检出铜绿假单胞菌。
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