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dna体外扩增的原理

时间:2022-10-20 百科知识 版权反馈
【摘要】:聚合酶链反应简称PCR技术,是一种体外扩增特异DNA片段的技术。因此,该技术现已广泛应用到分子生物学研究的各个领域。也正是由于此酶的发现,PCR技术得到了广泛地应用,使该技术成为遗传与分子生物学分析的根本性基石。到目前为止,PCR技术已有十几种之多,例如,将PCR与反转录酶结合,成为反转录PCR,将PCR与荧光标记技术相结合就成为荧光定量PCR等。
聚合酶链反应技术_分子生物学实验手

聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)简称PCR技术,是一种体外扩增特异DNA片段的技术。该方法一改传统分子克隆技术的模式,不通过活细胞,操作简便,在数小时内可使几个拷贝的模板序列,甚至一个DNA分子扩增107~108倍,大大提高了DNA的得率。因此,该技术现已广泛应用到分子生物学研究的各个领域。

人类对于核酸的研究已经有100多年的历史。20世纪60年代末、70年代初,人们致力于研究基因的体外分离技术。但是,由于核酸的含量较少,一定程度上限制了DNA的体外操作。Khorana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想。但是,当时的基因序列分析方法尚未成熟,对热具有较强稳定性的DNA聚合酶还未发现,寡核苷酸引物的合成仍处在手工、半自动合成阶段,这种想法似乎没有任何实际意义。

1985年,美国科学家Kary Mullis在高速公路的启发下,经过两年的努力,发明了PCR技术,并在Science杂志上发表了关于PCR技术的第一篇学术论文。从此,PCR技术得到了生命科学界的普遍认同,Kary Mullis也因此而获得1993年的诺贝尔化学奖。但是,最初的PCR技术相当不成熟,在当时是一种操作复杂、成本高昂、“中看不中用”的实验室技术。1988年初,Keohanog通过对所使用的酶的改进,提高了扩增的真实性。尔后,Saiki等人又从生活在温泉中的水生嗜热杆菌内提取到一种耐热的DNA聚合酶,使得PCR技术的扩增效率大大提高。也正是由于此酶的发现,PCR技术得到了广泛地应用,使该技术成为遗传与分子生物学分析的根本性基石。在以后的几十年里,PCR方法被不断改进:它从一种定性的分析方法发展到定量测定;从原先只能扩增几个kb的基因到目前已能扩增长达几十个kb的DNA片段。到目前为止,PCR技术已有十几种之多,例如,将PCR与反转录酶结合,成为反转录PCR,将PCR与荧光标记技术相结合就成为荧光定量PCR等。

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