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分子克隆和pcr扩增

时间:2022-03-13 理论教育 版权反馈
【摘要】:聚合酶链反应是在细胞外(体外)快速扩增特异DNA片段的技术,故又称体外基因扩增技术或无细胞分子克隆系统。该技术是近10年来发展最快、应用最广的现代分子生物学技术。1985年,美国Cetus公司的Kary Mullis首创PCR技术。此后,PCR技术成为一种极为有效地获得或放大特异基因信号的重要手段。目前,PCR技术已被广泛应用于分子克隆、序列分析、基因突变、遗传病的诊断及法医学鉴定和考古学研究等诸多领域,已普及到许多普通实验室。

聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是在细胞外(体外)快速扩增特异DNA片段的技术,故又称体外基因扩增技术或无细胞分子克隆系统(cell-free molecular cloning)。该技术是近10年来发展最快、应用最广的现代分子生物学技术。

过去,DNA扩增一般采用分子克隆法,需将构建的含有目的基因的载体导入细胞进行扩增,并需要用探针进行筛选,涉及DNA酶切、连接、转化、培养及探针杂交等技术,虽然技术上已无难点,但操作复杂,需数周到数月的时间,且不利于普及,限制了许多重大课题的研究。

1985年,美国Cetus公司的Kary Mullis首创PCR技术。该技术可以将微量目的DNA片段扩增100万倍以上,Kary Mullis因此获1993年诺贝尔化学奖。此后,PCR技术成为一种极为有效地获得或放大特异基因信号的重要手段。该技术的优点是敏感度高、特异性强、产率高、重复性好以及快速简便等,省去了靶基因在细胞之间来回搬运的烦琐操作,人们称之为分子克隆技术中的一次重大革命,对基础研究、实际应用、推动现代分子生物学技术的发展具有难以估量的作用。目前,PCR技术已被广泛应用于分子克隆、序列分析、基因突变、遗传病的诊断及法医学鉴定和考古学研究等诸多领域,已普及到许多普通实验室。

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