三、分子克隆方法
1.参照下表：
只写出了双链DNA中从5ˊ到3ˊ的一条链。每种酶的切点以箭头表示。
被下列限制性内切酶切割后，突出端的情况(5’或3’端)和长度如何？
a.AluI；b.BglII；c.ClaI；d.KpnI；e.MboI；f.PvuI；g.NotI
2.为什么需要将DNA连在载体上进行克隆呢？
3.简述将DNA片段克隆到pBR322载体PstI位点处的过程。如何筛选含有插入片段的克隆？
4.简述将DNA片段克隆到pUC18载体BamHI和PstI位点处的过程。如何筛选含有插入片段的克隆？
5.简述将DNA片段克隆到Charon载体EcoRI位点处的过程。
6.你打算克隆一段1kb的cDNA。本章中所提到的载体哪些适合？哪些不适合？为什么？
7.你打算构建一个平均长度为45kb的基因文库。本章中所提到的哪个载体最为合适？为什么？
8.你打算构建一个平均长度为100kb的DNA文库。本章中所提到的哪个载体最为合适？为什么？
9.已经用λphagemid载体构建了一个cDNA文库。如何在该文库中筛选你感兴趣的基因？简述使用寡核苷酸探针和抗体探针的方法。
10.如何从M13phage载体中获得单链克隆DNA？从phagemid载体中呢？
11.图示一种构建cDNA文库的方法。
12.图示切口平移(nicktranslation)的过程。
13.简述PCR技术扩增目的DNA的过程。
14.反转录PCR(RT-PCR)和标准PCR有什么不同？何时使用RT-PCR？
15.简述使用载体产生末端带有寡聚组氨酸的融合蛋白的过程。用纯化蛋白的过程说明寡聚组氨酸标签的好处。
16.λ插入载体和λ替换载体有什么不同？各有什么优点？
17.简述利用杆状病毒表达系统表达克隆的基因。较原核表达系统而言，它有什么优点？
18.使用哪种载体可以将目的基因转入植物中(例如烟草)？图示具体操作过程。
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