一、目的要求
通过病毒汁液的机械接种，了解植物病毒的传染性和传播方式，并掌握病毒机械损伤接种的基本原理和方法。
二、材料和用具
（一）实验材料
1.毒源：烟草花叶病毒（TMV）及黄瓜花叶病毒（CMV）。
2.接种用健株：辣椒幼苗或心叶烟草。
3.缓冲液：1%的K2HPO4溶液。
（二）实验用具
研钵（肥皂水洗后，煮沸15min）、纱布（肥皂水洗后，煮沸15min）、洗瓶（装有蒸馏水）、金刚砂（400~600筛目）、85%的酒精、离心机、离心管、标牌、肥皂等。
三、内容和方法
（一）实验原理
植物病毒是一类核蛋白分子，无主动侵染的能力，但可经汁液摩擦（又称机械摩擦）、传毒介体及嫁接进行传染。 汁液摩擦传染常只发生于有病毒存在的表皮薄细胞内所谓花叶型病毒上，其机制就是通过摩擦在健康寄主植物表皮薄壁细胞细胞壁和蜡质层上造成微伤口，病毒经微伤口进入细胞内而引起植物发病。 介体传染是大多数植物病毒田间扩散的重要方式。 介体在含有病毒的植株上取食后，病毒可进入其口针、食道，甚至进入体液循环系统。当其再迁移到其他健康植株上取食时，就会把病毒传染到其他健康植株上。介体传染具有专化性，而且不同的介体—病毒组合，其传毒过程不尽相同。嫁接传染实质上是病毒在愈合的病健组织之间进行运转传导的结果，只要砧木或接穗带毒，嫁接成功后，系统侵染的病毒就会使嫁接苗全株带毒。 嫁接可以传播任何种类的病毒及类病毒。 本次实验只做机械接种。
（二）实验方法
1.汁液摩擦接种法
（1）提取病毒
采集典型烟草花叶病病叶，抽去主脉。 剪成小块，称重后放入研钵中，加入等量磷酸缓冲液，研磨成匀浆。 用双层纱布过滤，然后离心（3000r/min，30min），上清液即为病毒粗提液，待接种用。
（2）摩擦接种
取健康辣椒幼苗，在叶片上面撒一薄层金刚砂，左手托住辣椒叶片的背面，右手食指蘸病毒汁液（双手须用肥皂洗净，并冲走肥皂液），在撒有金刚砂的叶面上轻轻摩擦2次，立刻用洗瓶冲洗叶片。 接种完毕，挂牌写上病毒名称，接种方式、日期和接种人。
另取健康辣椒幼苗，在叶面上撒一薄层金刚砂，以缓冲液代替病毒汁液重复上述操作，作为对照。
（3）培养诱发症状
接种后的植株放在室温（20℃左右）环境中培养，隔虫条件，加强植株生长管理，4~7d后观察发病情况，并记录结果。
2.直接接种法
直接接种是指不需制备接种汁液，用病组织直接在叶面上接种。 对于一些不稳定的病毒，在制备汁液时容易被钝化，或是由于病组织材料少，所以很适合用该方法。
（1）在接种叶片上撒一薄层金刚砂。
（2）将几片有明显症状的病叶选在一起，卷成筒，用消毒刀片快速切出割口，立刻将切面在撒有金刚砂的叶面上来回摩擦。 在接种第2株时，重新切出割口，用新的切面摩擦接种。
（3）接种后用清水冲洗，挂上标签。
（4）培养诱发症状，并做好记录。
3.喷枪接种法
本方法的原理是利用喷枪的喷射压力，将金刚砂和病毒汁液一起喷在叶片上，金刚砂打击叶面造成微伤，同时病毒完成侵入。 这种方法适用于同时接种大量的植株，如在苗期中，从大量的植株里筛选抗病的材料。
（1）提取病毒汁液，方法同汁液摩擦接种。
（2）在50m L病毒粗提取液中加5g金刚砂，一起装入压缩式喷雾器中。
（3）打足喷雾器的气体，喷射压力为7.5~20kg/10mm2。喷头距接种植株50~100mm，向叶面喷射，喷射前和喷射中要摇动喷枪，防止金刚砂下沉。
（4）接种完毕，及时用清水冲洗叶面，挂上标签。
（5）培养诱发症状，并做好记录。
4.注射接种法
机械传染病毒还可以将病株汁液注入健株的茎或叶脉，但该方法使用得不多。 对于虫媒传播的黄化型病毒，汁液摩擦接种往往难以成功，而用注射的方法将病毒注入寄主的韧皮部则可以获得成功。
（1）提取病毒汁液，方法同摩擦接种。
（2）用小号注射器吸取病毒汁液，从供试植株的茎部或叶脉处，缓缓注入病毒汁液，注意不要刺穿叶脉或刺入茎内髓部。
（3）接种完毕后挂牌，培养诱发症状，并做好记录。
（三）注意事项
1.每种接种方法都必须设置对照组和重复。
2.手指摩擦制造微伤口时不能太用力。
四、实验学时
3学时。
五、作业与思考题
1.每人交接种植株1~2株（叶片3~5片），并完成实验报告1份。
2.摩擦接种中为什么要在接种叶面上撒放金刚砂？对金刚砂的颗粒大小是否有要求？
3.汁液摩擦接种、直接接种、喷枪接种、注射接种各在什么情况下采用？
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
