一、目的要求
了解根肿菌、卵菌的主要形态特征，掌握与植物病害有关的重要属的形态特征、分类依据及所致病害的症状特点。 同时学习使用检索表来鉴定病原菌，为分类鉴定打下初步基础。
二、材料和用具
（一）实验材料
相关植物病害的标本、病原菌的培养物或永久玻片，水霉和腐霉游动孢子的形成和释放录像。
（二）实验用具
显微镜、擦镜纸、浮载剂（蒸馏水或乳酚油）、载玻片、盖玻片、挑针、刀片、通草、剪刀、吸水纸、酒精灯、火柴等。
三、内容和方法
（一）根肿菌纲（Plasmodiophoromycetes）
1.根肿菌属（Plasmodiophora）
观察芸薹根肿病（P.brassicae）标本的症状，注意受害植株的根部是否肿大。 镜检芸薹根肿病菌永久玻片，观察休眠孢子的分布位置、形态及有无细胞壁。 对比有病菌侵害和没有病菌侵害的植物细胞的大小及内含物。 注意区分原生质团和休眠孢子。
2.粉痂菌属（Spongospora）
观察马铃薯粉痂病（S.subterranea）标本的症状。 镜检马铃薯粉痂病菌永久玻片，观察休眠孢子的分布和形态特征以及有病菌的寄主细胞有无明显肿大。
3.多黏菌属（Polymyxa）
观察禾谷多黏病菌（P.graminis）引起的小麦病害症状。用镊子撕取小麦根基皮层，制成临时玻片镜检，或镜检禾谷多黏病菌永久玻片，观察病菌休眠孢子及其排列特征。
（二）卵菌纲（Oomycetes）
1.水霉目（Saprolegniales）
通常生活于水中或潮湿土壤中，营腐生生活，仅少数与植物病害有关，如寄生于稻苗引起烂秧。
（1）水霉属（Saprolegnia）
孢子囊圆筒形或棍棒状，新孢子囊从老孢子囊内的基部长出。 游动孢子具明显的两游现象〔水稻烂秧水霉菌（S.monilifera）〕。观看水霉属的游动孢子两游现象录像。
（2）绵霉属（Achlya）
观察水稻烂秧症状。 用镊子取病苗放于盛有浅水的培养皿中，直接在低倍镜下检查，或用镊子小心撕下病苗上的棉絮状物制成临时玻片镜检。 注意比较游动孢子囊和菌丝的形态有无显著区别，观察孢子囊的层出现象属于哪种层出类型，游动孢子释放是迅速离开孢子囊还是在排孢孔口处休止、聚集，观察是否产生有性器官，仔细观察藏卵器、雄器和卵孢子的形态，雄器的位置，藏卵器内卵球的数目。
根据所观察到的病原菌形态，参照水霉属和绵霉属的分类依据，推测所看到的病菌属于哪个属。
2.霜霉目（Peronosporales）
许多霜霉目卵菌是重要的植物病原菌。
（1）腐霉属（Pythium）
瓜果腐霉（P.aphanidermatum）可以引起多种经济作物幼苗的猝倒病和果实的绵腐病。
观察黄瓜病果上的白色菌丝体。 将生长旺盛的小块菌丝体移至清水中20℃培养24~48h，菌丝顶端即形成大量游动孢子囊，用挑针挑取在清水中培养过的菌丝制片镜检。 观察腐霉菌的游动孢子囊。 注意区分菌丝、孢囊梗和孢子囊。 观察泡囊及游动孢子的形态特征。注意观察藏卵器和雄器的特征，并与水稻绵霉菌的藏卵器和雄器相比较。
（2）疫霉属（Phytophthora）
致病疫霉（P.infestans）引起马铃薯晚疫病。观察受害马铃薯叶片的病害症状。 观察当气候潮湿时病叶背面常出现的灰白色霜状霉层是病菌的什么形态，挑取少许霉状物制片，镜检。 观察孢子囊是什么形状，孢囊梗和菌丝的形态有何不同。或挑取烟草疫霉（P.nicotianae）水培养中的菌丝体，用水作为浮载剂制片，镜检。 注意孢子囊顶部的乳头状突起，折光率较强的即乳突。注意有无球形厚垣孢子，观察孢子囊形状的变化。将玻片放入4℃冰箱5~10min，取出立即镜检，观察孢子囊内游动孢子的形成和释放过程，注意其与腐霉菌的区别。
上述两个疫霉种均为异宗配合菌种，将两种不同交配型的菌株移植在同一平板上于18~20℃培养10~20d，就会出现有性生殖过程。挑取两菌株形成的菌落交界处带培养基的菌丝镜检雄器和藏卵器的形态，比较马铃薯晚疫病菌和腐霉菌的藏卵器与雄器的着生方式有何区别。
（3）霜疫霉属（Peronophthora）
荔枝霜疫霉病菌（P.litchi）为害荔枝引起霜霉病，观察受害果实症状。取病果挑取霉层制片镜检，注意其孢囊梗直立，双叉锐角分枝，孢囊梗多级有限生长；孢子囊柠檬形、椭圆形，乳突明显。
（4）单轴霉属（Plasmopara）
观察葡萄霜霉病（Pv.iticola）标本，注意为害部位及症状特点。 挑取葡萄霜霉病病叶病斑上的霉层制片镜检，观察孢子囊梗的形态，注意分枝特点及分枝末端的特征。
（5）假霜霉属（Pseudoperonospora）
观察黄瓜霜霉病（Pc.ubensis）标本，注意为害部位和症状特点。 挑取霉层制片镜检，观察孢囊梗和孢子囊，注意孢囊梗的分枝特点，区分其与霜霉属形态有何异同。
（6）盘梗霉属（Bremia）
观察莴苣霜霉病（Bl.actucae）标本，注意症状特点。挑取病叶上的霉层制片镜检，观察孢子囊梗的形态，注意分枝末端是否膨大呈盘状，边缘是否有小梗，孢子囊的形态及着生位置如何。
（7）霜霉属（Peronospora）
十字花科植物霜霉菌（P.parasitica）为害油菜和其他十字花科蔬菜引起霜霉病。 观察十字花科霜霉菌为害油菜叶片正面和背面及花序的症状。 取白菜霜霉病叶片，用挑针挑取少量在叶背面的霜霉制片镜检，注意观察孢囊梗的分枝和顶端形态以及孢子囊有无乳突。
（8）白锈菌属（Albugo）
观察白锈病症状特征。 制作苋菜白锈病菌（A.bliti）或白菜白锈病菌（A.candida）临时玻片镜检，观察其孢子囊堆和孢子囊梗的形态特征以及孢子囊的排列方式。
取白菜白锈病肿大的茎或荚，选取白色疱斑处切片，置于滴加乳酚油的载玻片上，用酒精灯略加热，使病组织透明，然后盖上盖玻片镜检。 可观察到白锈病菌的卵孢子，1个藏卵器内只有1个卵球。 卵孢子表面有刻点状花纹，是白锈菌分类的依据之一。
3.指梗霉目（Sclerosporales）
本目区别于霜霉目的主要特征是孢囊梗主轴粗壮或分化程度较低，专性寄生于禾本科植物。
（1）指梗霉属（Sclerospora）
观察禾生指梗霉（S.graminicola）引起的谷子白发病的症状特点。镜检病原菌永久玻片，观察孢囊梗的形态、分枝，游动孢子囊及卵孢子的形态。
（2）霜指霉属（Peronosclerospora）
观察玉蜀黍霜指霉（P.maydis）引起玉米霜霉病的症状特点。镜检病原菌永久玻片，观察孢囊梗的分枝及形态，游动孢子囊及卵孢子的形态。
（3）指疫霉属（Sclerophthora）
观察大孢指疫霉（S.macrospora）引起小麦霜霉病的症状特点。镜检病原菌永久玻片，观察孢囊梗的形态及分枝、游动孢子囊及卵孢子的形态。
四、实验学时
3~5学时。
五、作业与思考题
1.观察十字花科蔬菜根肿病菌、马铃薯粉痂病菌、禾谷多黏病菌，绘制休眠孢子囊图。
2.绘制瓜果腐霉病菌、马铃薯晚疫病菌或十字花科蔬菜白锈病菌孢囊梗、孢子囊、卵孢子图。
3.绘制白菜霜霉病菌孢囊梗、孢子囊图。
4.卵菌纲有哪些特点？结合它们的生物学特点、寄生性及病害特点描述卵菌纲的进化情况。
附8-1 霜霉目真菌科及主要属分类检索表
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