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原生质体融合和再生

时间:2022-02-17 理论教育 版权反馈
【摘要】:融合是指将两亲本原生质体通过生物、化学或物理的方法融为一体的过程。最初的原生质体融合是以仙台病毒为介导来融合的,但操作复杂,融合率低,现已很少采用。近年来,高压电脉冲作为一种物理手段在原生质体融合中的作用越来越受到重视。原生质体因为失去了细胞壁,虽然具有生物学活性,但不能繁殖。为了大量得到融合子,必须在再生培养基上恢复细胞壁。
原生质体融合和再生_微生物学

融合是指将两亲本原生质体通过生物、化学或物理的方法融为一体的过程。最初的原生质体融合是以仙台病毒为介导来融合的,但操作复杂,融合率低,现已很少采用。后来发展出了以PEG(聚乙二醇)为介导的化学融合,在Ca2+或Mg2+等阳性离子存在下,PEG能使原生质体紧密粘连在一起,最终达到融合。据报道,天蓝链霉菌(Streptomyces coelicolor)和小小链霉菌(S.parvullus)使用该法的融合频率可高达20% 。但由于PEG对细胞有一定毒性,接触时间一般不应超过1min。近年来,高压电脉冲作为一种物理手段在原生质体融合中的作用越来越受到重视。原生质体在低电场中极化成偶极子,并沿电力线方向排列成串,加高压直流脉冲后,相邻两个原生质体的膜被瞬时击穿,从而导致融合的发生。此法对细胞无任何伤害作用,而且融合过程可在显微镜监视下进行,只要配备一套显微操作仪,即使不对亲株进行标记,也可方便地挑取融合子。

原生质体因为失去了细胞壁,虽然具有生物学活性,但不能繁殖。为了大量得到融合子,必须在再生培养基上恢复细胞壁。再生就是使原生质体重新长出细胞壁回复到完整细胞形态的过程。再生也应在高渗培养基上进行,再生率随不同菌株而异,一般为3% ~20% 。

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