放线菌的培养技术及形态观察

实验五　放线菌的培养技术及形态观察

一、实验目的

（1）进一步学习并掌握光学显微镜低倍镜和高倍镜的使用方法。

（2）了解并观察放线菌的形态特征。

二、实验原理

放线菌是指能形成分枝丝状体或者菌丝体的一类革兰氏阳性菌，常见的放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝（简称基丝），基丝长到一定程度还能向空气中生长出气生菌丝（简称气丝），并进一步分化产生孢子丝以及孢子。有的放线菌只产生基丝而无气丝。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。

观察放线菌的形态特征常用插片法、玻璃纸法和印片法。

三、实验器材

（1）菌种：放线菌（灰色链霉菌，Streptomyces griseus）3～5d培养物。

（2）试剂和培养基：0．1%美兰染色液、高氏Ⅰ号琼脂培养基。

（3）仪器或其他用具：灭菌的平皿、灭菌盖玻片、载玻片、接种环、接种铲、镊子、显微镜、擦镜纸、双层瓶等。

四、实验步骤

插片法观察放线菌的形态。

（1）接种：用接种环挑取菌种斜面培养物接种到斜面试管培养基中。

（2）培养：28℃培养3～5d。

（3）倒平板：取高氏Ⅰ号琼脂培养基融化并冷却至约50℃后倒平板，凝固待用。

（4）接种：用接种环挑取斜面培养物（孢子）在平板上划线接种。

（5）插片：以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以45°角插入琼脂内（插在接种线上），如图5－1，插片数量根据需要而定。

图5－1　插片法观察放线菌

1—盖玻片　2—培养基　左：侧面　右：正面

（6）培养：倒置28℃培养3～5d。

（7）镜检：用镊子小心拔出一片盖玻片，擦去背面培养物，然后将有菌的一面朝上放于载玻片上，干燥、固定，用0．1%美兰染色1min，观察时用暗光，先低倍镜后高倍镜，最后用油镜观察。

五、实验记录

观察放线菌的基内菌丝、气生菌丝有何差别，孢子丝有何特征，并绘图说明。

六、思考题

（1）放线菌与细菌的菌落有何不同？

（2）镜检时如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？

参考文献

［1］肖明，王雨净．微生物学实验［M］．北京：科学出版社，2008．

［2］沈萍，范秀容，李广武．微生物学实验［M］．3版．北京：高等教育出版社，1999．

［3］熊元林．微生物学实验［M］．武汉：华中师范大学出版社，2008．