实验六 果蔬维生素C（抗坏血酸）的测定（2，6－二氯酚靛酚滴定法）
一、实验目的与要求
1．目的 新鲜食品中的维生素C主要以还原型的形式存在，测定还原型维生素C可以粗略了解该食品中维生素C的浓度。
2．要求 掌握新鲜食品中的维生素C的常规化学测定方法。
二、实验原理
还原型维生素C可以还原2，6－二氯酚靛酚（蓝色）。被测样品中维生素C含量与2，6－二氯酚靛酚的量呈正比，且2，6－二氯酚靛酚在酸性条件下呈粉红色。当用2，6－二氯酚靛酚标定样品溶液时，其终点为被测溶液呈粉红色。
三、实验仪器与试剂
1．仪器
（1）公用仪器
①组织捣碎机1台；
②托盘天平1台；
③1 000ml烧杯2个；
④250ml烧杯2个；
⑤20cm镊子1把；
⑥记号笔1～2个。
（2）分组及仪器：2人一组，每组仪器包括：
①100ml具塞量筒2个；
②10ml量筒1个；
③5ml移液管2根；
④酸式滴定管1个；
⑤50ml烧杯2个；
⑥50ml三角烧瓶4个；
⑦漏斗2个；
⑧漏斗架1个；
⑨滤纸2张；
⑩洗耳球1个；
玻璃棒1个。
（所有仪器使用前清洗，烘干备用）
2．试剂
（1）2%草酸溶液。
（2）1%草酸溶液。
（3）淀粉指示剂：取1g可溶性淀粉，加10ml冷水调成稀粉浆，倒入正在沸腾的100ml水中，搅拌至透明，放冷备用。
（4）6%碘化钾溶液。
（5）0．1mol／L碘酸钾标准溶液：称取3．567 0g经烘干的基准碘酸钾溶解并定容到1 000ml。
（6）0．001mol／L碘酸钾标准溶液。
（7）维生素C标准溶液：称取纯L－抗坏血酸粉末20mg，用1%草酸溶解定容到100ml。
标定：准确吸取维生素C标准溶液5ml于小锥形瓶中，加入6%碘化钾0．5ml，淀粉指示剂3滴，混匀后用0．001mol／L标准碘酸钾溶液滴定至蓝色刚出现为止。
式中：V———消耗碘酸钾标准溶液的体积ml；
0．088———0．001mol／L碘酸钾1ml相当于维生素C的毫克数。
（8）2，6－二氯靛酚溶液：称取52mg碳酸氢钠，溶于200ml沸水中。称取50mg 2，6－二氯靛酚，溶解于上述碳酸氢钠溶液中，冷却后，移入250ml容量瓶中，蒸馏水定容，过滤于棕色瓶中，贮于冰箱，每周至少标定一次。
标定：吸取维生素C标准溶液2ml，加入1%草酸5ml，以2，6－二氯靛酚染料溶液滴定，至微红色15秒钟不褪即为终点。计算出每ml染料液相当的维生素C毫克数。
四、实验步骤
1．取300～500g新鲜水果，置于1 000ml烧杯内，称重，精确至0．01g。
2．将样品倒入组织捣碎机，加入等量2%草酸（W∶V），加盖旋紧，匀浆2～5min。
3．取出匀浆物质（以上统一进行）。
4．用50ml烧杯称取20g匀浆物质，精确度1%，编号，记录。
5．将称取的匀浆物质倒入具塞量筒，用1%草酸反复洗涤烧杯（3次），其洗涤液倒入具塞量筒，并用1%草酸定容到100ml。
6．加塞后将匀浆物质与1%草酸充分混合，静置10min。
7．取上液过滤。
8．用5ml移液管吸取5ml滤液置于三角烧瓶内，加入5ml 1%草酸（2个平行样品）；用5ml移液管吸取5ml蒸馏水，加入5ml 1%草酸（2个空白对照）。
9．2，6－二氯酚靛酚染料滴定至终点（淡粉红色，15s不褪色），记录染料消耗量。
10．计算每100g样品中维生素C的含量（ml）及平行样品误差范围，公式如下：
五、实验结果与分析
参照《食物成分表》（全国平均值）。
六、实验报告
七、注意事项
大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶，因此，抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用2%草酸溶液制成匀浆以保存维生素C。
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