【摘要】：将特异性抗体与荧光素以化学共价键的方式结合，结合后不影响两者的性质。常用的荧光抗体标记方法有搅拌法和透析法。特点是标记所需的时间短，荧光素用量少，但易引起非特异性荧光染色。透析法适用于标记样品量少、蛋白含量低的抗体。抗体标记完成后，还应对标记抗体进一步纯化，以去除游离的荧光素及其降解产物。荧光抗体在使用前需加以鉴定。抗体效价大于1∶16者较为理想。
二、荧光抗体的制备
（一）荧光素标记抗体的制备
将特异性抗体与荧光素以化学共价键的方式结合，结合后不影响两者的性质。标记方法要求简单、安全、结合物稳定、易于保存。常用的荧光抗体标记方法有搅拌法和透析法。以FITC标记为例：
1.搅拌标记法 将待标记的蛋白质溶液用缓冲液平衡后，在磁力搅拌下逐滴加入FITC溶液，然后离心，上清液即为标记物。此法适用于标记体积较大、蛋白含量较高的抗体。特点是标记所需的时间短，荧光素用量少，但易引起非特异性荧光染色。
2.透析法 先将待标记的蛋白质溶液装入透析袋中，放入含FITC的缓冲液中过夜即可。透析法适用于标记样品量少、蛋白含量低的抗体。特点是标记比较均匀，非特异性荧光染色较低，但荧光素用量较多。
（二）荧光素标记抗体的纯化
抗体标记完成后，还应对标记抗体进一步纯化，以去除游离的荧光素及其降解产物。常用的方法有透析法和凝胶过滤法。
（三）荧光抗体的鉴定
荧光抗体在使用前需加以鉴定。鉴定内容包括抗体效价、荧光素与蛋白质的结合比率（F/P）和抗体特异性。抗体效价大于1∶16者较为理想。一般用于固定标本的荧光抗体染色以F/P=1.5为宜，用于活细胞染色的以F/P=2.4为宜。
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