血药浓度测定

茶碱的测定方法很多，有UV、GC、HPLC、荧光分光光度法、免疫测定法（包括RIA、EMIT、FPIA、CEDIA、底物标记荧光免疫法（SL-FIA）、浊度抑制免疫法（NIIA）、薄层扫描内标法、高效毛细管电泳法（HPCE）等。GC法专属性强，灵敏度高，但操作繁琐，现已很少应用。RIA法灵敏度高，但当咖啡因及茶碱的主要代谢物量大时，有交叉反应而干扰测定。实验提示HPLC法或UV法用于测定茶碱浓度与FPIA方法结果有较高相关性，但从药物监测要求快速、专属性强的角度出发，FPIA法更适用于茶碱的临床监测和药物动力学研究，所以目前FPIA方法更常用于测定茶碱血药浓度。

（一）紫外分光光度法

这是最早用于测定血中茶碱浓度的方法。该法易开展，但专属性差，容易受干扰，呋塞米、保泰松、水杨酸、磺胺类药等都会干扰其测定。样品需两步提取，且易乳化。但与HPLC、FPIA相比，有试剂价格低廉、仪器易得等优点，故至今仍有基层单位使用紫外分光光度法作为临床常规测定血中茶碱浓度。

采用FPIA法和UV法平行测定51例茶碱血清浓度，线性回归分析发现两种方法有较高的相关性。用HPLC法和UV法平行测定慢性阻塞性肺病患者的血清茶碱浓度123例，两种方法之间有良好的线性关系（r＝0．976　1），UV法较HPLC法测得的血清茶碱浓度低，但血药浓度的差异并不影响茶碱的主要药代动力学参数值及由此预测的给药剂量。

血样测定方法：取0．5ml血清，加入0．1mol／L HCl　0．2ml混合，用含5%异丙醇氯仿液5ml振荡提取，离心后，吸取下层氯仿液4ml，用0．1mol／L NaOH4ml反提，用751型分光光度计在274nm和298nm波长处测定。以浓度对△A（A274nm－A298nm）作校正曲线，线性范围为2．78～13．9μmol／L，回收率为（83．5± 2．7）%。

（二）高效液相层析

HPLC法测定茶碱的报道很多，专属性强且灵敏度高，应用较为广泛，与FPIA法对临床茶碱血清浓度测定结果具有较高的相关性。

1．正相HPLC法色谱条件　色谱柱为5mm×150mm YWG 80～5μm硅胶柱（自装），流动相为氯仿∶异丙醇∶冰醋酸（89∶10∶1，V／V），流速为1．0ml／min，进样量20μl，检测波长254nm。线性范围：0．85～8．51μg／ml。

2．反相HPLC法色谱条件　色谱柱为CLC-ODS柱（15cm× 6mm，10μm）；流动相为0．02mol／L硫酸锂的甲醇溶液∶水（35∶65），流速为0．5ml／min；检测波长254nm。线性范围：1～70μg／ml。检测低限0．01μg／ml。

3．柱切换反相HPLC法色谱条件　预处理柱50mm×5mm ID，内装颗粒；分析柱150～5mm ID，内装HITACHI GEL3056（ODS）5μm颗粒，高压匀浆装柱。预处理流动相为纯水；分析流动相为甲醇∶乙腈∶水（25∶5∶70），流速分别为3．0ml／min和1．1ml／min；检测波长273nm。线性范围：0．5～40μg／ml。最低检测浓度50ng／ml。

4．固相萃取反相HPLC法色谱条件　色谱柱为InertsilODS-2柱（15cm×4．6mm，5μm）；流动相为乙腈∶水（5∶95），流速为1．0ml／min；柱温40℃；检测波长280nm。线性范围：0．1～10μg／ml。

（三）荧光偏振免疫分析法

FPIA法由于快速、灵敏、专属性强，有条件的单位现多采用此法进行茶碱的临床监测。测试仪器、试剂盒、校正曲线盒、质控盒均为美国Abbott公司产品。

操作方法：先将全自动荧光偏振免疫分析仪（TDx）按操作手册作浓度、光度、吸量及质控标准检查，经校准合格，符合仪器标准。血样经离心分离出血清后，用TDx仪自动测定。

（四）克隆化酶供体免疫分析法

CEDIA法在常规生化分析仪上就可进行快速分析，单个样品仅需15min。用CE-DIA法和HPLC法平行测定63例样本，在测定线性范围内两种方法高度相关（r＝0．987），且患者的茶碱药代动力学参数均无明显差异。CEDIA法特别适用于中小型医院临床血药浓度的监测。