蛋白结合测定

蛋白结合测定

目前最通用的一种激素测定方法，也是命名最混乱的一种测定方法。通常用的免疫测定法，放射免疫测定法，受体结合测定法和血浆蛋白结合测定法，都属于这一类测定方法。世界卫生组织根据其测定原理对蛋白结合测定法提出新的分类标准和统一命名。这些分类标准包括：

1．在测定中是否需要标记物。

2．标记的是被测物还是结合蛋白。

3．在测定系统中被测物过量还是结合蛋白过量。

4．测定的是被测物本身（直接法）还是结合蛋白（间接法）。

5．在测定系统中是否需要分离步骤。

据上述标准，以免疫测定为例，介绍几种测定方法：

不用标记物的蛋白结合测定法——免疫测定法

基于被测物（抗原）与其特异结合蛋白（抗体）结合时所出现的沉淀线作为测定指标的，在测定系统中加入的抗体是过量的。操作较为迅速和方便。但这一测定法只适应于测定大分子物质，被测物的浓度较高，只有这样才形成能用肉眼看到的抗原-抗体复合物，这类方法应用较少。

标记抗原的免疫测定法——放射免疫测定法

这是以标记抗原和未标记抗原与同一抗体的竞争性结合反应为基础的。

随着未标记抗原增加，在反应系统中复合物中标记的抗原越来越少，因而在仪器上所测到的放射性记数也越来越少，由此可以作出一条标准曲线，并从标准曲线上查出被测样品的含量。放射免疫测定法既能测定蛋白质类的大分子物质，也能测定半抗原一类的小分子物质。放射免疫测定法的灵敏度高，样品用量少，并便于自动化操作。放射免疫测定法属结合蛋白（抗体）限量测定，标记的是被测物（抗原），所以它属于直接测定。

标记抗体的免疫测定——免疫放射计量测定法

这是标记特异抗体。在反应系统中加入过量的标记抗体以便使全部被测抗原与之结合，然后，将结合和未结合的抗体分开。用吸附剂除去未结合的抗体，因此最后在仪器上测到的是结合型的抗体，这是一种间接测定，并且是一种过量蛋白结合试剂测定法。它与放射免疫测定法有本质上的区别。过量蛋白结合试剂测定法反应迅速，反应更为灵敏，但特异性较差。为了克服这一不足，有人发展了一种夹心面包免疫放射计量测定法，大大提高了特异性和灵敏度。

非同位素标记的免疫测定

除用同位素作标记物之外，还有许多化合物可用作标记物。如酶、荧光素、病毒、金属、红细胞、乳酸和其他许多特异显色颗粒。非同位素免疫测定的命名可按放射免疫命名的格式来表示。如，放射免疫测定、酶免疫测定、荧光免疫测定和病毒免疫测定等。

用非同位素标记抗体的免疫计量测定，也可仿照免疫放射计量测定法的命名来表示。如，免疫酶计量测定；免疫荧光计量测定。

以上仅仅以抗体作为结合试剂为例命名，对以其他结合蛋白为结合试剂相似的测定，也可以同样格式命名。

不经分离步骤的免疫测定法——猝灭测定

差不多所有标记测定法都需要一种适当的分离步骤，以便把反应系统中最终的结合型和游离型标记物分开进行测定。但是分离步骤会导致偏差，影响测定结果。有些分离技术需要熟练的技巧。猝灭型测定法一般用于测定半抗原化合物。其基本原理是，先将标记物——酶与半抗原分子结合，当抗原同酶结合后在空间构型上发生变化，此抗原与抗体结合后其酶不再同底物发生作用，酶的活性失效（或称作猝灭）。