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人类轮状病毒抗原的测定

时间:2022-04-14 理论教育 版权反馈
【摘要】:轮状病毒感染后主要侵犯空肠的微绒毛上皮细胞,使其凋亡。一般于发病后8h内可检查出轮状病毒,但发病后3d或第4天排出病毒的量最大。人轮状病毒的感染主要经粪-口途径进行传播。人对轮状病毒普遍易感。95%左右的人轮状病毒感染见于5岁以下的儿童。2.慢性轮状病毒性肠炎常见于免疫功能低下的婴幼儿和成人,腹泻症状可持续长达数月。3.轮状病毒试纸条是一种敏感的筛查检测。

轮状病毒、腺病毒、星病毒、诺瓦克病毒等病毒和沙门菌、大肠埃希菌等细菌以及隐孢子虫和贾第虫等寄生虫均可以引起人类腹泻和胃肠炎。1岁和4岁以下儿童分别有45%和40%的腹泻是由病毒引起的。

人轮状病毒(human rotavirus)是5岁以下儿童胃肠炎的主要诱因,流行率超过50%。轮状病毒通过粪-口途径传播。约经过3天的潜伏期后会引起发热、呕吐以及腹泻,可持续10d之久。每年有1.4亿的腹泻病例是由轮状病毒引起,在发展中国家每年有87万人死于轮状病毒感染(WHO,1997)。由于其传染性非常强,因而即使在美国这样的发达国家,每年也有75~125个儿童死于轮状病毒感染,并且它在感染高危人群的儿童中传播速度极快。1978年我国庞其方等在北京的一次婴幼儿急性胃肠炎流行调查中,首次从患儿粪便中检出人类轮状病毒,并确定了其与秋季婴幼儿腹泻的关系。在昆明的一次调查中发现,感染高峰期在10月至次年1月。年龄分布以婴幼儿多见,主要集中在5岁以下,尤其6个月至2岁发病率最高,而6个月以下婴儿即使被感染,病情常较轻或无症状。

轮状病毒是急性胃肠炎的重要病原,呈球形,直径60~80nm,核心为双股RNA,由11个节段组成,外有双层衣壳,内层壳粒呈放射状排列,与薄而光滑的外层衣壳形成轮状,故名为轮状病毒,具双层衣壳的病毒有传染性。轮状病毒按习惯分为小儿轮状病毒、成人轮状病毒以及非典型轮状病毒,有按其VP6组抗原特性分为A~G 7个组。导致人类腹泻的仅有A、B、C三组。A组即婴幼儿腹泻的最主要的原因。

轮状病毒感染后主要侵犯空肠的微绒毛上皮细胞,使其凋亡。病变细胞脱落,微绒毛变短,变钝。取而代之的是原位于隐窝底部的具有分泌功能的细胞。由于上述病变导致小肠功能丧失,水与电解质分泌增加,吸收减少,引起腹泻。另外小肠微绒毛上皮细胞功能障碍时,双糖酶分泌减少,乳糖不能被消化吸收,在肠道内积聚引起渗透性腹泻。

轮状病毒对理化因子的作用有较强的抵抗力。病毒经乙醚、氯仿、反复冻融、超声、37℃1h或室温25℃24h等处理,仍具有传染性。该病毒耐酸、碱。95%的乙醇是最有效的病毒灭活剂,56℃加热30min也可灭活病毒。

轮状病毒的传染源主要是轮状病毒胃肠炎患者,潜伏期为1~7d,一般为48h以内。人轮状病毒侵入人体后在小肠绒毛上皮细胞中复制,并随粪便大量排出。一般于发病后8h内可检查出轮状病毒,但发病后3d或第4天排出病毒的量最大。人轮状病毒的感染主要经粪-口途径进行传播。虽然有研究人轮状病毒感染可能通过呼吸道传播,但缺乏可靠的实验数据。

人对轮状病毒普遍易感。6个月以内婴儿由于体内存在母亲的抗体,发病比较少,随着抗体的消失可导致隐性感染或发病。95%左右的人轮状病毒感染见于5岁以下的儿童。年龄越小隐性感染越多,显性感染的高发年龄为4~36月龄的婴幼儿。感染后可获得较稳固的免疫力。成年人也可感染发病,特别是护理轮状病毒感染患儿的成年人、老年人和免疫功能低下者。

轮状病毒检测包括抗原与抗体的检测,由于抗体的检测存在窗口期问题,感染一段时间后才能被检测到,因此在临床上一般用粪便标本来检测轮状病毒抗原。

【检测原理】 这是一种以胶体金均相免疫层析系统为基础的检测试剂。排泄物标本必须由试剂盒提供的稀释液稀释。硝酸纤维膜上包被有针对轮状病毒的抗体。检测的特异性与包被在胶体金上的针对轮状病毒A族蛋白VP6的单克隆抗体相关。将试纸条放入排泄物抽提液中,胶体金结合物与标本一起移动,当移动至硝酸纤维膜上的抗轮状病毒多抗时,如果标本中含有轮状病毒,则胶体金-轮状病毒结合物会与抗轮状病毒多抗结合,5min内出现一条暗红色的检测线。溶液继续移动与包被在膜上的一种抗鼠IgG抗体相遇,形成第二条红线(质控线)。

【适应证】 秋冬季节,婴幼儿发生呕吐、黄色水样便。

【标本采集】 粪便标本必须在采集后立即检测。如有必要,在2~8℃的条件下可以保存24h,或在-20℃的条件下可以保存更长的时间。保证标本不能与甲醛或含有甲醛的溶液接触。

【操作方法】

1.在每一试管中加0.5ml或15滴稀释液。

2.将含有粪便标本的取用装置投入管中,稀释比率最高不能超过4%w/v,相当于10μl的含量。

3.搅拌溶液直至均匀并孵育1~2min。

4.丢掉取用装置,然后按蓝色箭头方向插入试纸条。

5.使之反应5~10min,最多不超过15min。

注意:强阳性标本在1~3min内可以检测出。避免胶体金接触溶液,浸入的液体不要超过纸条上蓝色箭头的位置。

【结果判读】

出现质控线结果为阴性;

质控线和测试线均出现为阳性;

质控线和测试线均未出现检测为无效。

注意:只出现最下面的测试线表明此次检测无效。出现这种情况需对标本重新检测。如需保存结果,则移除吸水材料后使纸条干燥即可。干燥后检测线上会出现一条很微弱的阴影。

【参考范围】 阴性。

【临床意义】

1.轮状病毒引起的婴幼儿急性胃肠炎发病急,80%患儿先呕吐,随即频繁地腹泻,多为黄色水样便,无黏液和脓血。大便每日10~20次,腹泻严重时伴明显的失水。约30%患儿伴有39℃左右的发热。病程较短,一般2~6d。

2.慢性轮状病毒性肠炎常见于免疫功能低下的婴幼儿和成人,腹泻症状可持续长达数月。腹泻期间粪便长期排病毒,成为本病的传染源。

3.婴幼儿轮状病毒感染的其他表现,可引起新生儿坏死性小肠炎,婴儿肠套叠、婴儿肺炎、脑炎、脑膜炎。此外,婴幼儿轮状病毒感染还可伴有突发性婴儿死亡综合征、瑞氏综合征、溶血性尿毒综合征、川崎病和克罗恩病等。

【方法学优点】

1.简便、快速、准确,5~10min出结果。

2.与酶免法比较特异性:97.7%,敏感性:97.1%,准确性:97.6%。

【局限性】

1.轮状病毒试纸条试剂盒的结果必须与所有其他可获得的临床和实验室信息相比较。

2.阳性的检测也不能排除其他病原菌存在的可能。

3.轮状病毒试纸条是一种敏感的筛查检测。在此筛查后收集的粪便标本可能含有低于试剂敏感性水平的抗原成分。

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