蛋白质上样样品制备过程

蛋白质组学是人类基因组计划研究发展的基础上形成的交叉学科，主要是从整体水平研究细胞内蛋白质的组成，结构及其自身特有的活动规律。蛋白质组学研究内容主要有两方面：一是结构蛋白质组学；二是功能蛋白质组学。蛋白质组学主要研究技术如下。

1．双向凝胶电泳技术（2-DE）　是目前应用最为广泛的研究蛋白质组学的方法。双向凝胶电泳技术利用蛋白质的等电点和分子量差别将各种蛋白质区分开来。虽然双向凝胶电泳难以辨别低丰度蛋白，对操作要求也较高，但其通量高、分辨率和重复性好以及可与质谱联用的特点，使其成为目前最流行、可靠的蛋白质组研究手段。

2．高效液相色谱技术（HPLC）　多维液相色谱作为一种新型分离技术，不存在相对分子质量和等电点的限制，通过不同模式的组合，消除了双向凝胶电泳的歧视效应，具有峰容量高、便于自动化等特点。二维离子交换-反相色谱（2D-IEC-RPLC）是蛋白质组学研究中最常用的多维液相色谱分离系统。

3．表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术（SELDI-tof）　是目前蛋白质组学研究中比较理想的技术平台。SELDI技术分析的样品不需用液相色谱或气相色谱预先纯化，因此可用于分析复杂的生物样品。SELDI技术只需少量样品，在较短时间内就可以得到结果，且试验重复性好，适合临床诊断及大规模筛选与疾病相关的生物标志物。

4．放射性核素标记亲和标签（ICAT）技术　是近年发展起来的一种用于蛋白质分离分析技术，此技术目前是蛋白质组研究技术中的核心技术之一。该技术用具有不同质量的放射性核素亲和标签（ICATs）标记处于不同状态下的细胞中的半胱氨酸，利用串联质谱技术，对混合的样品进行质谱分析。来自两个样品中的同一类蛋白质会形成易于辨识比较的两个不同的峰形，能非常准确地比较出两份样品蛋白质表达水平的不同。ICAT的好处在于它可以对混合样品直接测试；能够快速定性和定量鉴定低丰度蛋白质，尤其是膜蛋白等疏水性蛋白等；还可以快速找出重要功能蛋白质。

5．生物信息学　利用生物信息学对蛋白质组的各种数据进行处理和分析，也是蛋白质组研究的重要内容。生物信息学的发展，已不仅是单纯的对基因组、蛋白质组数据的分析，而且可以对已知的或新的基因产物进行全面分析。因此，生物信息学已成为蛋白质组学研究中不可缺少的重要部分。