氨基酸和蛋白质的鉴定

时间：2022-02-13 理论教育版权反馈

【摘要】：1%甘氨酸，1%酪氨酸，1%色氨酸，蛋白质溶液，茚三酮试剂，1%硫酸铜，浓硝酸，硝酸汞试剂，红色石蕊试纸。在试管中加入2mL蛋白质溶液和4mL 30%的氢氧化钠溶液。［5］氨基酸和蛋白质都能与茚三酮作用，生成紫色，反应十分灵敏。［6］任何蛋白质或其水解中间产物均有缩二脲反应，这表明蛋白质或其水解中间产物均含有肽键。在氨基酸中只有酪氨酸含有酚羟基，所以，凡能与硝酸试剂作用显砖红色的蛋白质，其组成中必定含有酪氨酸单位。

Identification of Saccharides，Am ino Acides and Proteins

【目的要求】

1.加深对糖类主要化学性质的理解，掌握糖类的鉴别方法。

2.熟悉氨基酸和蛋白质的特征颜色反应及其鉴别方法。

【仪器与试剂】

仪器:水浴锅，显微镜。

试剂:2%葡萄糖，2%果糖，2%蔗糖，2%淀粉，2%麦芽糖，15%麦芽糖，班氏试剂，苯肼试剂，莫利许试剂，浓硫酸，10%氢氧化钠，30%氢氧化钠，0.1%碘液，间苯二酚溶液(西里瓦洛夫试剂)。

1%甘氨酸，1%酪氨酸，1%色氨酸，蛋白质溶液，茚三酮试剂，1%硫酸铜，浓硝酸，硝酸汞试剂，红色石蕊试纸。

未知物试样:Ⅰ2%葡萄糖，果糖，蔗糖溶液;

Ⅱ2%淀粉，麦芽糖，蔗糖溶液;

Ⅲ1%甘氨酸，1%酪氨酸和蛋白质溶液。

【实验内容】

1．糖类的性质鉴定

(1)糖的还原性——Benedict试验取五支试管各加入班氏试剂10滴，再分别加入5滴2%葡萄糖、2%果糖、2%蔗糖、2%麦芽糖、2%淀粉，在沸水浴中煮沸2～3min，取出冷却，观察有无红色或黄色沉淀，比较其结果。

(2)成脎反应取试管三支分别加入5滴2%葡萄糖、2%果糖、2%蔗糖［1］，再各加入5滴苯肼试剂。另取一支试管加入5滴15%麦芽糖溶液和10滴苯肼试剂，将四支试管充分振摇，置沸水中加热20min后取出，若尚无结晶，可将试管放入冷水中冷却后再观察。比较各试管中成脎的速度和脎的颜色。取各种脎少许，在显微镜下观察糖脎的晶形。

(3)糖的颜色反应

1)莫利许(Molish)试验［2］:取四支离心试管，分别加入2%葡萄糖、2%果糖、2%麦芽糖、2%淀粉各5滴，然后加入莫利许试剂2滴，摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸约5滴，此时硫酸与糖溶液应很清楚地分成两层，观察两液面间紫色环的出现。若无紫色环，可将试管在热水浴中加热3～5 min，再观察现象。

2)西里瓦洛夫(Seliwanoff)试验［3］:取四支试管，各加入间－苯二酚的盐酸溶液10滴，然后在三支试管中分别加入2%葡萄糖、2%果糖、2%蔗糖溶液各5滴，第四支试管留作对照用，摇匀后，同时放入水浴中加热两分钟，观察有无颜色变化，记录颜色的深浅，此实验有何意义?

3)淀粉与碘的作用［4］:取1支试管，加入0.5mL 2%淀粉溶液，再加1滴0.1%碘液，溶液是否显蓝色?将试管在沸水浴中加热5～10 min，观察有何变化?放置冷却，又有何变化?

2．氨基酸和蛋白质的颜色反应

(1)与茚三酮的反应［5］取4支试管，编号，分别加入1mL 1%的甘氨酸、酪氨酸、色氨酸和蛋白质溶液，再分别滴加3～4滴茚三酮试剂，在沸水浴中加热10～15min，观察现象。

(2)缩二脲反应［6］在试管中加入2mL蛋白质溶液，2mL 10%氢氧化钠溶液，然后加入2滴1%的硫酸铜溶液，摇动试管，观察现象。

(3)黄蛋白反应［7］取1支试管，加入蛋白质溶液1 mL，再滴加浓硝酸7～8滴，此时浑浊或有白色沉淀，加热煮沸，溶液和沉淀都呈黄色，冷却，逐滴加入10%氢氧化钠溶液，颜色由黄色变成更深的橙色。

(4)蛋白质与硝酸汞试剂的反应［8］在试管中加入2 mL蛋白质溶液和硝酸汞试剂2～3滴，小心加热，此时原先析出的白色絮状物聚成块状，并显砖红色。

3．碱分解蛋白质

在试管中加入2mL蛋白质溶液和4mL 30%的氢氧化钠溶液。在试管口放一湿润的红色石蕊试纸，把混合液加热煮沸3～4min，有何气体放出?试纸是否变色?

4．鉴定未知物

从指导老师处领取一组未知试样，试鉴别之。

本实验约需3 h。